天然甜味剂甜菊糖具有较高的经济价值,其中最具开发价值的单体为莱鲍迪苷A(RA)。目前国内大部分生产厂家通过重结晶法获得高纯度的RA单体,其结晶母液中残留大量的甜菊苷混合物,其中RA约占10～30%,通过常规工艺无法有效提高其纯度,造成结晶母液的堆积或以低附加值的产品消耗。探索从甜菊糖结晶母液中纯化RA的分离工艺有重要的现实意义。本文从色谱填料的合成入手,通过结构修饰聚合物色谱填料设计出适合甜菊糖苷高效分离的色谱填料并优化分离工艺完成课题目标。首先以单分散PS-DVB基球为改性基础填料,成功在基球上引入了羧基基团：第一步以二氯乙烷作为溶胀剂,将10g干燥的PS-DVB填料和2：5的65%浓硝酸和98%的浓硫酸溶液混匀,50℃条件下反应5小时得到硝化填料。第二步以二氯化锡作为还原剂,在75℃下回流反应12小时得到氨基填料。最后一步以氢氧化钠为催化剂,氨基填料和氯乙酸的质量比为1:2,反应条件60℃,反应12小时,得到化学键合羧基填料。其次,建立了以化学键合羧基填料为分离介质的分析型高效液相色谱,主要考察流动相组成、比例对于甜菊苷(ST)和RA分离度的影响,使甜菊糖结晶母液中ST和RA达到基线分离。同时,从分离机理出发,对比了原始PS-DVB填料、改性后氨基填料和羧基填料对于ST和RA的分离度差别。最后,以改性羧基填料为分离介质运用中压制备色谱法(MPLC)分离纯化甜菊糖结晶母液,考察RA单体的纯度、产率、回收率,研究了不同的流动相比例、进样浓度、进样体积以及流动相流速对分离纯化过程的影响。建立了优化的操作条件：流动相为乙腈/=80/20(v/v),进样浓度为280mg/ml,进样体积为0.4ml,流速为4ml/min,分离得到的RA单体纯度为90.22%,回收率79%,为从低含量甜菊糖结晶母液中纯化RA单体的工业化生产提供了一种有效的途径。