PAR-2激动剂对小鼠肠动力的影响及其作用机制研究

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目的:蛋白酶激活受体-2(Proteinase-actived receptors-2,PAR-2)属于七次跨膜的G蛋白偶联受体,胰蛋白酶、肥大细胞释放的类胰蛋白酶以及人工合成的多肽SLIGRL-NH2、SLIGKV-NH2都可激活该受体。PAR-2受体在胃肠道广泛表达,除与胃肠道上皮细胞的离子转运、内脏敏感性等功能有关外,还与胃肠动力的调控密切相关,但具体的调控机制尚未明确。本实验研究PAR-2 mRNA及蛋白在小鼠胃肠道的表达情况及PAR-2激动剂对小鼠胃肠动力的影响,并着重探讨PAR-2激活后对小鼠离体回肠纵行肌收缩振幅的影响及其相关作用机制。  方法:  1、分别通过RT-PCR及免疫组织化学法研究小鼠胃肠道(胃、十二指肠、空肠及回肠)中PAR-2 mRNA及蛋白的表达情况;  2、活体实验:将120只雌性BABL/c小鼠随机进行分组,共分为6组,每组20只,分别为空白对照组、抑氨肽酶素A对照组、LRGILS-NH2(5μmol/kg)+抑氨肽酶素A组、SLIGRL-NH2(1μmol/kg)+抑氨肽酶素A组,SLIGRL-NH2(2.5μmol/kg)+抑氨肽酶素A组、SLIGRL-NH2(5μmol/kg)+抑氨肽酶素A组,测定各组药物对小鼠胃内色素排空率和小肠推进率的影响;  3、离体实验:观察胰蛋白酶、SLIGRL-NH2、LRGILS-NH2及各种预处理药品(阿托品、TTX、辣椒素、NK1拮抗剂及NK2受体拮抗剂)作用后对小鼠回肠纵行肌收缩振幅的影响。  结果:  1、PAR-2 mRNA在小鼠消化道(胃、十二指肠、空肠及回肠)均有广泛表达;PAR-2在小鼠消化道(胃、十二指肠、空肠及回肠)的粘膜层、粘膜下层、肌层均呈免疫阳性反应;  2、在体实验:PAR-2激动剂对小鼠胃内色素排空率和小肠推进率的影响  2.1抑氨肽酶素A组与空白对照组相比,对小鼠胃内色素排空率和小肠推进率影响均无统计学意义(p>0.05)。  2.2与空白对照组相比,SLIGRL-NH2在2.5μmol/kg及5μmol/kg浓度时均能显著提高胃内色素排空率和小肠推进率(p<0.001)。  2.3与空白对照组相比,LRGILS-NH2即使在5μmol/kg也不能明显影响小肠推进比和胃内色素排空率(p>0.05);  3、离体实验:PAR-2激动剂及相关工具药对小鼠回肠纵行肌收缩振幅的影响。  3.1 PAR-2激动剂(胰蛋白酶、SLIGRL-NH2)都可以增强小鼠离体回肠纵行肌的自主收缩幅度,并呈现浓度依赖效应;PAR-2反肽LRGILS-NH2(10-9-10-5M)对小鼠离体回肠纵行肌的自主收缩幅度无明显影响。  3.2阿托品对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应无明显影响。  3.3 TTX对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应的影响:TTX(2uM)预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩幅度振幅(p<0.05);与此类似的是TTX(2uM)预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比,也明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅(p<0.05)。  3.4辣椒素对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应的影响:辣椒素(10-4M)预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅(p<0.05);辣椒素(10-4M)预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比,也明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅(p<0.05)。  3.5 NK1及NK2受体对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应的影响:sc-203095(1uM)预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅(p<0.05);MEN10376(1uM)预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌振幅(p<0.05);sc-203095(1uM)、MEN10376(1uM)预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌振幅(p<0.05);sc-203095(1uM)预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅(p<0.05);MEN10376组(1uM)预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅(p<0.05);sc-203095(1uM)、MEN10376(1uM)预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅(p<0.001)。  结论:  1、PAR-2在小鼠的胃肠道(胃、十二指肠、空肠、回肠)中呈广泛表达状态,与小鼠胃肠动力的调控密切相关。  2、在活体实验中PAR-2激活后能够明显的促进小鼠胃肠道食物的通过。  3、在离体实验中PAR-2激动剂能明显增强小鼠离体回肠纵行肌的收缩振幅,并且这种增强作用与神经有关,主要涉及TRPV1敏感的感觉神经通路及NK1和NK2受体。
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