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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)是目前世界上公认的最有效,应用最广泛的生物农药。Bt HD-1是一株应用于生产的工业菌株,为获得高毒的Bt菌株,本实验以HD-1为初始菌株,进行了紫外,亚硝基胍,N+离子注入诱变,筛选出了对棉铃虫高毒力的诱变菌株。
确定了致死率75%时的最佳诱变条件分别为:(1)紫外照射时间7min,照射距离30cm。(2)亚硝基胍浓度为0.2mg/mL,反应条件为30℃30min。(3)N+离子剂量为80×2.5×1013N/cm2,离子强度为10Kev。
通过镜检和晶体蛋白含量的初筛和生物测定的复筛,筛选到了5株正突变最明显的诱变菌株B47、B28、S159、B209和S218,这些菌株对棉铃虫的毒力分别提升了87%,140%,87%,92%和100%。传代实验结果表明,传代10次后诱变菌株的晶体蛋白含量也未明显下降。
对这5株诱变菌株的菌落外观和伴孢晶体形态进行了观察,发现菌落外观并无变化,伴孢晶体仍以菱形晶体为主,另有锥形、不规则和小体型晶体。分别对其晶体蛋白溶液进行SDS-丙烯酰胺电泳,并对蛋白条带进行了分析。结果表明,这几株高毒诱变菌株的晶体蛋白分子量多为130kD和65kD。结合生物测定结果可以得出,此两类蛋白均对棉铃虫有毒力。从5株诱变菌株中挑出了提升最大的一株B28,按PB实验→最陡爬坡法→响应曲面法的顺序对其原始发酵培养基组分进行优化,得到了B28最佳培养基组分为:牛肉膏4.5g/L;蛋白胨10g/L;NaCl5.3g/L;葡萄糖3g/L;MgSO40.3g/L;K2HPO4.0.8g/L;MnSO40.05g/L。验证实验表明,苏云金芽孢杆菌B28的晶体蛋白的产量提高了57.8%。
对Bt发酵液和阿维菌素复配悬浮剂的各类助剂:乳化剂,分散剂,增稠剂,载体,防冻剂,防腐剂等的种类和加入量进行了筛选,根据悬浮液的理化性质确定了最终的复配悬浮剂的配方:Bt发酵液80%、阿维菌素原粉2%、FS14%、木质素磺酸钠1%、黄原胶0.15%、丙三醇2%、BHT0.1%、硅酸镁铝1.2%、盐酸环丙沙星0.0009%以及适量的酸度调节剂和消泡剂。产品标准测定结果表明,该水悬浮剂配方粘度、悬浮率、粒度、分散性、倾倒性、离心稳定性、pH和贮存稳定性等方面符合国家标准。棉铃虫生测结果表明,该悬浮剂的共毒系数(CTC)为141>120,两种有效成分之间有很好的增效效果。