耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌危险因素、耐药基因及分子流行病学研究

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目的1.了解阜阳市人民医院住院患者耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌感染临床分布特征及其对临床常见抗菌药物的耐药性情况;2.分析感染耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的危险因素;3.分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌分子流行病学特征;4.筛查耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌携带的碳青霉烯酶和碳青霉烯酶基因;5.为对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌防控及治疗提供理论指导及科学依据。方法1.收集2018年1月~2019年6月安徽阜阳市人民医院住院患者耐碳青霉烯肺炎克雷伯(CRKP)菌株及患者的一般临床资料(CRKP组),并把同时期感染碳青霉烯类敏感的肺炎克雷伯菌(CSKP)住院患者为对照组(CSKP组);2.采用梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定仪鉴定入选患者病原菌情况,同时利用质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行病原菌复核;3.使用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定分析仪对入选病原菌进行药敏实验;4.对CRKP菌株进行同源性分析;5.采用改良碳青霉烯类灭活试验(m CIM)、Carba NP试验对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌株携带的碳青霉烯酶进行筛查;6.采用胶体金免疫层析法对细菌携带的碳青霉烯酶进行筛查;7.利用PCR法检测碳青霉烯酶基因blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP及blaOXA-48;8.运用SPSS 23.0软件处理,其中计数资料以(%)表示行卡方检验,分析感染耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌单因素,采用Logistic回归法分析感染耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的多因素。P<0.05具有统计学差异。结果1.入选耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌86株,主要来源科室为重症监护室(ICU)、呼吸危重病医学科、普外科,送检样本类型以痰液标本为主,其次是全血、尿液。2.86株CRKP,呈多重耐药特征。其中对头孢呋新、头孢曲松、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦均100%耐药;对亚胺培南、美罗培南、厄他培南耐药率分别为100%、98.84%、100%;CRKP对替加环素的敏感度100%。3.同源性分析:86株CRKP可分为A、B、C、D、E及F型,其中A型47株为最多,B型14株,C型16株,D型6株,E型1株、F型2株,A型分布情况:ICU检出25株、呼吸危重病医学科ICU检出12株、普外科检出4株;B、C、D、E及F各株型,呈散发分布。4.机械通气、应用3种及以上抗菌药物是感染耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的危险因素。5.m CIM试验、Carba NP试验对细菌携带的碳青霉烯酶筛查阳性率分别为93.02%,91.86%。6.胶体免疫层析法检测碳青霉烯酶:86株CRKP中,阳性76株,阴性10株(阴性样本号:21、30、37、43、47、49、50、66、77、81),阳性率88.37%,其中检出KPC型碳青霉烯酶73株,NDM型碳青霉烯酶3株,OXA-48、VIM、IMP型碳青霉烯酶均未检出。7.PCR基因分型:86株CRKP中,76株检出碳青霉烯酶基因,阴性10株(阴性样本号:21、30、37、43、47、49、50、66、77、81),阳性率88.37%。其中检出含blaKPC基因73株,含blaNDM组基因3株,耐药基因blaVIM、bla IMP、blaOXA-48、均未检出。结论1.阜阳市人民医院的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌来源主要为重症监护室(ICU)、呼吸危重病医学科、普外科,耐药菌分布广泛、需要严格防控。2.痰液标本是耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的主要来源,其次是全血、尿液。呼吸系统对耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌易感,泌尿系统、血流的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌感染不容忽视。3.分离的CRKP呈多重耐药特征,对临床常见抗菌药物高度耐药,仅替加环素敏感度高。应对CRKP的耐药情况密切关注。4.CRKP的主要克隆株集中在ICU、呼吸危重病医学科,应引起关注,并采取相应的防御和干预措施。5.机械通气、应用3种及以上抗菌药物是感染CRKP的危险因素,诊疗中应加强对危险因素关注和预防。6.Carba NP试验、m CIM试验对CRKP携带的碳青霉烯酶检出率接近,m CIM操作更简便、操作时间更短。m CIM比Carba NP更适合临床推广应用于CRKP碳青霉烯酶检测。7.胶体免疫层析法对碳青霉烯酶的检出率与PCR法符合率100%,因胶体免疫层析法有操作简便、检测时间短、费用低等优点,推荐临床应用。8.本院分离的CRKP携带碳青霉烯酶基因以blakp C-2和blaNDM-1类为主,碳青霉烯酶基因分布相对单一,blaNDM基因型的流行情况应被关注。
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