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目的:探讨穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)诱导软骨肉瘤(Chondrosarcoma,CHS)细胞凋亡的作用机制。方法:1.采用cell counting kit-8(CCK-8)法、结晶紫染色法、流式细胞术、蛋白质印迹法(Western Blotting,WB)等相关技术检测穿心莲内酯对软骨肉瘤细胞增殖,细胞周期、凋亡及相关蛋白的影响。2.采用免疫组织化学法(Immunohistochemical,IHC)检测SOX9蛋白在不同病理分级软骨肉瘤组织中的表达;WB法检测穿心莲内酯对SOX9蛋白表达的影响。3.利用RNA干扰技术在软骨肉瘤细胞中分别敲低SOX9、β-catenin、TCF-1后,检测软骨肉瘤细胞增殖情况和下游相关基因的表达。4.利用免疫荧光法、蛋白核质分离法、WB法检测穿心莲内酯对β-catenin和TCF-1蛋白细胞亚定位的影响。5.利用MG132和环己酰亚胺(Cycloheximide,CHX)处理软骨肉瘤细胞,探索穿心莲内酯对TCF-1和SOX9蛋白稳定性或者内源性蛋白合成的影响。6.采用si RNA干扰技术、RT-PCR和WB法探索β-catenin、TCF-1与SOX9之间的关系,并研究穿心莲内酯的主要靶点。成果:1.穿心莲内酯可抑制软骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞G2/M期阻滞,促进软骨肉瘤细胞凋亡。2.SOX9在软骨肉瘤组织中高表达,而且主要在细胞核中表达;其表达水平从中分化到低分化的软骨肉瘤组织中逐渐升高。WB结果显示穿心莲内酯不依赖细胞密度和类型降低SOX9的表达,而且同时降低软骨肉瘤细胞核质中SOX9蛋白的表达。3.在软骨肉瘤细胞中分别敲低SOX9、β-catenin、TCF-1均可抑制软骨肉瘤细胞的生长,并下调下游相关基因的表达。4.穿心莲内酯可降低TCF-1 m RNA和蛋白的表达,但不影响β-catenin m RNA和蛋白的表达。TCF-1主要分配于软骨肉瘤的细胞核中,而且穿心莲内酯明显地降低了细胞核中TCF-1蛋白的表达,但没有影响β-catenin的亚细胞定位。5.MG132恢复了被穿心莲内酯下调的TCF-1和SOX9,CHX可以抑制TCF-1和SOX9蛋白的合成,而且穿心莲内酯可进一步缩短TCF-1和SOX9蛋白的半衰期。6.β-catenin、TCF-1和SOX9可能存在负反馈调节环路,其中TCF-1是穿心莲内酯的主要靶点。结论:穿心莲内酯通过诱导细胞G2/M期阻滞进而促进软骨肉瘤细胞凋亡,同时也发现SOX9在软骨肉瘤组织中高表达,且与软骨肉瘤的病例分级具有正相关性;敲低SOX9后可通过诱导p21蛋白的表达抑制软骨肉瘤细胞的生长;穿心莲内酯促进软骨肉瘤细胞凋亡的作用机制可能是通过靶向调控TCF-1/SOX9信号轴的表达(不依赖β-catenin)。