新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）强毒株引起、以感染禽类为主的一种急性、高度接触性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须上报的动物疫病,我国农业农村部将其列为一类动物疫病。ND自1926年首次报道以来,已发生四次全球大流行,不仅严重危害了家禽养殖业的发展,也给全球养殖业造成了巨大的经济损失。近年来,由于ND疫苗的普遍使用和我国家禽养殖业规模化程度不断提高,ND的流行在全国范围内得到了有效的控制,但由于NDV基因型的多样性、病毒的抗原变异及宿主类型众多,我国ND防控仍处于严峻状态。为了解当前NDV的分子流行病学特征,我们对2018—2020年实验室分离的新城疫病毒进行鉴定与遗传进化分析,以确定我国NDV流行株的基因型分布,旨在为我国ND防控提供数据参考。同时,根据近年来我国及周边地区NDV流行株的基因型,我们研制了针对基因Ⅶh亚型、Ⅻ型及ⅩⅢ型的ND疫苗,以防止这些基因型毒株在我国流行和暴发。1.我国新城疫病毒的分子流行病学研究2018-2020年从活禽市场和临床采集的样品中共分离到37株NDV。在活禽市场共分离到30株NDV,其中鸡源NDV 25株;鹅源和鸭源NDV分别为2株和3株。临床样品中分离到NDV 7株。遗传进化分析表明NDV分离毒株中,26株属于Class Ⅰ中的基因型1.1.2,均为弱毒株;5株属于Class Ⅱ的基因Ⅰ型,5株属于Class Ⅱ的基因Ⅱ型。值得注意的是,2020年从鹅群中分离到1株强毒NDV,属于Class Ⅱ的基因型Ⅻ型,该型NDV在我国首次于2010年从广东分离,交叉血凝抑制试验结果显示该基因型分离毒株与现有ND疫苗株之间存在较大抗原性差异。监测结果显示,虽然我国禽群中主要流行的是弱毒NDV,但仍可分离到强毒NDV,且与我国广泛使用的疫苗株基因型和抗原性存在差异,因此有必要研制新型的ND疫苗,以防止这类毒株在我国的传播与流行。2.新城疫流行毒株新疫苗的研制根据近年来亚州地区NDV流行基因型分析,本研究将NDV LX株基因组中编码F和HN蛋白胞外区基因序列分别替换成基因Ⅶh亚型、基因Ⅻ型和基因ⅩⅢ型NDV基因组的相应部分,利用反向遗传技术构建获得NDV/LX-ⅦhFHN、NDV/LX-ⅫFHN、NDV/LX-ⅩⅢFHN 3株重组NDV,重组病毒均具有较好的繁殖性能,且毒力弱。将3株重组病毒分别制成灭活疫苗、活疫苗免疫3周龄SPF鸡后,定期采血用于血凝抑制试验。免疫后3周分别以Ⅶh强毒株和Ⅻ型强毒株进行攻毒（目前无基因ⅩⅢ病毒分离株,免疫效力可参考免疫后的抗体效价）。攻毒后第3、5、7天分别采集泄殖腔和咽喉拭子用于病毒分离。结果显示:重组病毒弱毒疫苗和灭活疫苗免疫后诱导产生HI抗体效价可分别达到6 log2和8 log2以上;攻毒后免疫组鸡全部存活,重组病毒制备的疫苗对同基因型NDV强毒的感染可提供更好的排毒保护,试验鸡的排毒量低于现有疫苗免疫组。上述结果表明3株重组病毒适合于疫苗的制备,可以有效应对当前亚州地区新型NDV的传入与流行。