【摘 要】
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近年来,国内猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)株的变异导致原有PRV疫苗的保护能力下降,致使猪场伪狂犬病(Pseudorabies,PR)呈爆发趋势,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。猪PR主要表现为神经系统疾病和生殖系统疾病,如脑炎,共济失调和流产等。小胶质细胞(Microglia)是中枢神经系统(Central Nervous System)的免疫细胞,其广泛分布于
【基金项目】
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重庆市留创项目(cx2018096); 中央高校基本科研业务费专项资金项目(XDJK2020B014);
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近年来,国内猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)株的变异导致原有PRV疫苗的保护能力下降,致使猪场伪狂犬病(Pseudorabies,PR)呈爆发趋势,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。猪PR主要表现为神经系统疾病和生殖系统疾病,如脑炎,共济失调和流产等。小胶质细胞(Microglia)是中枢神经系统(Central Nervous System)的免疫细胞,其广泛分布于中枢神经系统,能够不停地清除受损的神经、斑块以及感染性物质等,在中枢神经系统的损伤和疾病的转归方面起着十分重要的作用。据相关研究发现,PRV感染会引起脑组织中小胶质细胞的活化和增殖,这暗示着小胶质细胞介导的脑部炎症反应在PRV损伤脑组织及神经疾病的转归过程中起着重要的作用。姜黄素(Curcumin,CUR)是从姜科植物根茎中提取出的一种黄色色素,具有抗炎、抗氧化、抗菌以及提高机体免疫力等药理作用。近年来,学者们发现CUR具有抗多种病毒的作用,且能透过血脑屏障。因此,我们推测CUR能够改善PRV引起的脑炎并可能对病毒的复制起到一定的抑制作用。为了证实以上假设,并初步探索其中可能的分子机制,我们开展了以下的试验研究。体内试验:40只200±20g的SD大鼠(雌雄各半)确定最佳感染剂量后,将60只200±20g的SD大鼠(雌雄各半)随机分成6组:包含对照组(Control),病毒感染组(PRV),白藜芦醇(50mg/kg BW)阳性对照组(RES),低剂量(25mg/kg BW)CUR组(CUR L),中剂量(50mg/kg BW)CUR组(CUR M)和高剂量(100mg/kg BW)CUR组(CUR H)。阳性对照组和CUR各组每天腹腔注射相应浓度RES或CUR,对照组和病毒感染组每天注射相同剂量的载体溶剂(0.5%羧甲基纤维素)共计14天,试验的第8天,除对照组外,其余各组大鼠接种100μL 2.85×10~3TCID50/0.1m L的PRV稀释液。记录每天的体重、体温变化情况和死亡情况,并通过旷野试验测试中枢兴奋状态。试验结束时,麻醉并断头处死各组大鼠,取皮质制作病理切片以观察皮质的病理变化情况。以综合考察CUR对脑组织的抗炎抗病毒的效果。结果表明,在本试验中,CUR能够改善PRV引起的体温升高,生长抑制,中枢兴奋等临床症状。同时,CUR可以缓解PRV感染造成的大脑充血、皮质血管套现象和病变,降低大鼠的死亡率。体外试验:传代培养BV2小胶质细胞系并用CCK-8法确定不同浓度的CUR的细胞毒性,之后用安全浓度范围内的CUR预处理BV2细胞2h,再用MOI=0.5的PRV的感染BV2细胞24h,检测病毒滴度以及细胞炎症因子TNF-α,IL-6和MCP-1的变化情况,用Western Blot检测血红素加氧酶1(Heme oxygenase,HO-1)表达量的变化。以综合解析CUR的抗炎抗病毒效果以及可能的分子机制。结果表明,在本试验中,20μM以下浓度的CUR对BV2细胞没有明显的细胞毒性。CUR可以降低PRV子代病毒滴度,抑制PRV感染BV2细胞引起的TNF-α,IL-6和MCP-1等炎症因子的升高,进一步激活HO-1蛋白的表达来起到抗炎作用。结论:(1)体内试验中,CUR可以缓解PRV感染大鼠引起的中枢兴奋,体温升高,生长变缓和存活率降低。(2)体内试验中,CUR可以缓解PRV感染大鼠引起的脑组织充血淤血和皮质病变。(3)体外试验中,CUR阻止了PRV感染引起的小胶质细胞活力下降,减少了子代病毒滴度,并抑制了感染引起的TNF-α,IL-6和MCP-1的表达量增加,表明CUR具有抗病毒、抗炎效果。(4)体外试验中,HO-1可能介导了CUR抵抗小胶质细胞炎症的反应过程。
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