肺癌如今已成为发病率最高的恶性肿瘤,在男性中是死亡率最高的癌症,在部分发达国家的女性人群中肺癌也超过乳腺癌成为头号杀手。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)是肺癌中最常见的组织学类型,约占85%。对于Ⅰa-Ⅲa期的非小细胞肺癌,手术是主要的治疗手段,术后以含铂类的双药联合辅助化疗方案,必要时辅助放疗是标准的治疗方法。对于Ⅲb-Ⅳ期肺癌患者,以及复发患者,化疗、分子靶向治疗(包括EGFR-TKIs, ALK抑制剂等)及最新型的以PD-1/L1单抗为代表的免疫治疗是目前的主要治疗方式。但是,目前肺癌的总体生存期仍不高,甚至远低于大部分其他脏器的恶性肿瘤。目前,研究者及临床工作者们,尚缺乏有效、准确判断患者预后的指标。根据细胞凋亡原理,Bcl-2蛋白家族具备成为潜在的预后指标的可能。在肺腺癌患者人群中,药物有效率差、不良反应发生率高、耐受性差及药物耐药性等问题亟待解决。因此,开发新型的抗肿瘤治疗药物靶点、提供新型的药物研发思路,为将来科研工作者的工作重点之一。肿瘤基因组学(The Cancer Genome Atlas, TCGA)包含了来自大约11000患者30余种癌症类型的的基因组数据信息(突变,基因表达,DNA甲基化,突变拷贝数)。因此,该数据库为多层次探索癌症基因组学提供了可能。本研究从TCGA下载肺腺癌患者相关数据,并分组、亚组后,行生存分析。白皮杉醇是一类二苯乙烯类多羟基酚化合物,在葡萄等天然植物中含量较多,相关类似物还包括白藜芦醇、赤松素等。该类药物药理特点相似、功能多样,除抗氧化、清除自由基、保护心脑血管系统外,近年来还有研究者发现该类药物同样具有抗肿瘤活性。阿糖胞苷类似物吉西他滨主要作用于S期的恶性肿瘤细胞,除了抑制肿瘤细胞的DNA合成,还具有自增强机制。目前,吉西他滨是非小细胞肺癌药物治疗中一种最为常用的化疗药物,其有效率高、副反应可耐受。细胞程序性死亡是受到各类凋亡相关分子严格调控的一种细胞死亡,与发育、自稳定、恶性肿瘤的发生与发展、自身免疫性疾病等疾病的发生之间密切相关。Bcl-2蛋白质家族是控制细胞线粒体致凋亡因子释放的主要调控因子。在无死亡信号刺激时,Bcl-2及Bcl-xl等抗凋亡蛋白一般作为细胞器膜的整合膜蛋白被隔离起来,而Bak、Bad等促凋亡蛋白则以非活性的形式定位分布于胞质、或线粒体膜。当细胞受到某种死亡信号刺激后,促凋亡蛋白便发生空间构象变化,与膜上和膜内的抗凋亡蛋白发生相互作用,使抗凋亡蛋白丧失对细胞凋亡的抑制,从而发生细胞程序性死亡。第一部分Bcl-2蛋白家族成员Bcl-2, Bak, Bad, Bcl-xl mRNA表达量高低与肺腺癌患者生存期之间的关系目的：分析Bcl-2蛋白家族成员Bcl-2, Bak, Bad, Bcl-xl mRNA表达量与样本中肺腺癌病例生存期之间的关系。方法：从TCGA数据库下载279例肺腺癌(Ⅰ—Ⅳ期)病例资料、随访时间及Bcl-2,Bak, Bad, Bcl-xl mRNA表达量等数据,分别绘制出可Ⅰa-Ⅲa期组与Ⅲb-Ⅳ期组中各mRNA表达不同水平(以中位数分成高、低表达两个亚组)与样本中肺腺癌病例的Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank检验进行组间生存率比较。以a=0.05为检验水准,p<0.05有统计学意义。结果：1、对于Ⅰ a-Ⅲa期肺腺癌病例,Bcl-2高表达患者的中位OS为1026.0天,低表达患者的中位OS为922.0天,统计分析得出Bcl-2高表达组中位OS显著高于低表达组,有显著统计学意义(p=0.016). Bad高表达患者的中位OS为949天,低表达患者的中位OS为995天,统计分析得出Bad表达与患者生存期之间无统计学意义(p=0.805)。 Bak高表达患者的中位OS为950天,低表达患者的中位OS为952天,统计分析得出Bak表达与患者生存无统计学意义(p=0.752)。BCLXL高表达患者的中位OS为950天,低表达患者的中位OS为987天,统计分析得出BCLXL表达与患者生存无统计学意义(p=0.606)。2、对于Ⅲb-Ⅴ期肺腺癌病例,Bcl-2高表达患者的中位OS为697.0天,低表达患者的中位OS为976.0,统计分析得出Bcl-2低表达患者生存时间更长,但不具有统计学差异(p=0.06)。Bad高表达患者的中位OS为1043.0天,低表达患者的中位OS为826.0天。统计分析得出对于不可手术的患者,Bad表达与患者生存无统计学意义(p=0.641)。Bak高表达患者的中位OS为1043.0天,低表达患者的中位OS为826.0天,统计分析得出,Bak表达量与患者生存无关(p=0.290)。BCLXL高表达患者的中位OS为1043.0天,低表达患者的中位OS为826天,统计分析得出BCLXL表达与患者生存无统计学意义(p=0.785)。结论：对于本研究入组的Ⅰa-Ⅲa期肺腺癌病例,Bad、Bak mRNA表达量高低与生存之间无明显关系；Bcl-xl mRNA表达量与患者生存期之间存在负相关,符合基础理论结果,提示肿瘤组织内Bcl-xl mRNA表达量可作为一个Ⅰa-Ⅲa期肺腺癌病例潜在的预测预后的指标之一。对于本研究入组的Ⅲb-Ⅳ期肺腺癌病例,Bcl-2、Bad、 Bak mRNA表达量高低与本研究入组病例之间的关系,符合基础理论结果。这3者肿瘤组织内mRNA表达量可作为一个Ⅲb-Ⅳ期肺腺癌病例潜在的预测预后的指标之一。第二部分 白皮杉醇增强吉西他滨对人非小细胞肺癌A549细胞的抗肿瘤作用目的为提高吉西他滨在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)中的抗肿瘤作用,本研究探讨了白皮杉醇联合吉西他滨在人非小细胞肺癌A549细胞中的潜在的、协同抗肿瘤作用,为新型药物的开发寻找合适的靶点,提高非小细胞肺癌的治疗效果。方法培养A549细胞后,分成四组：1、空白对照组；2、白皮杉醇单药处理组；3、吉西他滨单药处理组；4、白皮杉醇+吉西他滨双联联合处理组。细胞经处理后,采用MTT法检测ICso值；流式细胞术分析白皮杉醇诱导肿瘤细胞凋亡相关数据；Western blot分析细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果MTT细胞活力检测显示白皮杉醇通过降低吉西他滨的IC50值,显著增强了吉西他滨的细胞毒性作用。流式细胞术分析显示白皮杉醇主要通过增加细胞凋亡晚期的细胞数目来发挥其药理学作用。Western blot结果显示吉西他滨诱导促凋亡蛋白Bad和Bak的表达,而经白皮杉醇预处理后的细胞,可进一步增强Bak的表达,导致细胞凋亡晚期的细胞数目的进一步增加。结论本研究发现,白皮杉醇通过增加促凋亡蛋白Bak的表达,增加A549细胞的凋亡,从而增强了吉西他滨的细胞毒性作用。本研究将为NSCLC治疗的联合用药措施提供一定的理论基础。