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黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr）为茄科枸杞属植物,分布于我国西北地区,果实紫黑色,富含花青苷,具有抗氧化、抗衰老、抗辐射作用。黑果枸杞的主要功能成分为矮牵牛素类花青苷,是含酚羟基的黄酮类化合物。因黑果枸杞产量低、价格高,从果实中提取花青苷没有效益;另外黑果枸杞果实中花青苷种类多,性质相似,分离提纯难度大,这对开展黑果枸杞花青苷性质的研究造成了制约。鉴于此,本课题以黑果枸杞离体叶片为材料,利用光照、蔗糖、激素3种环境因素联合诱导合成花青苷,通过正交实验优化诱导合成条件,并针对叶片诱导合成的花青苷进行定性、定量、纯化研究。为黑果枸杞花青苷合成、制备、纯化提供参考,主要研究内容如下:1.黑果枸杞离体叶片诱导合成花青苷条件优化研究。黑果枸杞种子组培30 d后获得无菌苗,利用叶片组培诱导合成花青苷;以光照、蔗糖、激素为诱导因素,采用L9（34）正交实验优化诱导条件;结果表明在恒温20℃条件下,培养基中蔗糖含量150 mM/L、脱落酸（ABA）含量1.0 mg/L,蓝光（450 nm）照射下诱导20 d,叶片中花青苷合成积累量最大。2.黑果枸杞离体叶片诱导合成花青苷的定性分析研究。诱导叶片采用UPLC-DAD-TQD分析,结合实验得到色谱、质谱、紫外数据及相关参考文献,鉴定出诱导合成的花青苷主要有4种,分别为:矮牵牛素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O-二葡萄糖苷;飞燕草素-3-O-芸香糖苷（对-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷;矮牵牛素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O葡萄糖苷;锦葵素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷。其中矮牵牛素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O葡萄糖苷含量最高,约占诱导合成总花青苷的75%。3.黑果枸杞离体叶片诱导合成的花青苷纯化研究。采用柱层析法对诱导叶片提取液进行分离纯化,提取液分别通过AB-8大孔树脂、聚酰胺和葡聚糖凝胶3种填料的层析柱,利用高效液相色谱进行检测。诱导叶片提取液经层析柱分离纯化后,得到纯度为95%的矮牵牛素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O葡萄糖苷。4.黑果枸杞离体叶片诱导合成花青苷的定量分析研究。采用香草酸-HCl比色法测定黑果枸杞果实和诱导叶片中原花青素含量,得出诱导叶片原花青素含量为0.72±0.21g/100g,约为果实原花青素的40%;采用pH示差法测定黑果枸杞果实和诱导叶片中总花青苷含量,得出诱导叶片中总花青苷含量0.96±0.28g/100g,约为果实总花青苷的30%。采用UPLC-DAD-TQD法,测定诱导叶片生成的花青苷中矮牵牛素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O葡萄糖苷含量为6.56±0.25 mg/100g,约为果实中该物质的25%。通过本课题研究,黑果枸杞离体叶片经诱导可获得4种黑果枸杞花青苷,其中矮牵牛素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O葡萄糖苷量最大,占总诱导合成花青苷的75%,约为果实中该花青苷含量的25%;该叶片诱导合成花青苷可纯化后得到纯度为95%的矮牵牛素-3-O-芸香糖（对-香豆酰）-5-O葡萄糖苷。该研究结果为获取黑果枸杞花青苷提供了新渠道,为制备黑果枸杞花青苷提供了一条新途径,可为黑果枸杞的综合开发利用提供参考。