嗜热厌氧乙醇杆菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)作为嗜热菌中乙醇产量较高的菌种，它具有生长温度高，较好的耐酸性等优点以及完整的纤维素和半纤维素代谢系统，这些优点使其成为乙醇生产菌改造的热点。转录系统因低背景干扰，反应成分明确，结果清晰准确成为研究菌体转录情况的有力工具。　　 嗜热乙醇杆菌的遗传转化体系建立包括：①寻找能够稳定存在于嗜热厌氧乙醇杆菌内的革兰氏阳性菌来源的复制子和构建整合质粒pTE—I2；②探索嗜热乙醇杆菌的电转化方法和超声转化方法，并且尝试通过转化的方法观察嗜热乙醇杆菌乙醇产量的变化。　　 用pHsh和热稳定性DNA连接酶构建的定向进化系统，寻找能够稳定存在于嗜热乙醇杆菌的革兰氏阳性菌来源的复制子。以质粒为模板，含有抗性基因的线性片段作为引物，热稳定性Tma DNA连接酶与Taq DNA聚合酶同时加入到PCR反应体系中进行反应。利用Taq DNA聚合酶在扩增过程中引入错配碱基，TmaDNA连接酶将扩增产物中的Nick进行连接，扩增出的目标PCR产物为环状的质粒，该PCR产物直接转化嗜热乙醇杆菌感受态细胞，并在与引物所带的选择标记相应的抗性培养基中，选择性地培养含突变基因的转化子。　　 Teth11作为一个背景完全未知的蛋白，通过本实验室之前的实验已经证实，Teth11能特异性结合在adhE基因上游启动子区域，此蛋白在体外转录系统中扮演阻遏蛋白的角色抑制基因表达。我们采取生物信息学预测蛋白结构，对其结构进行研究，发现该蛋白一级结构上具有两个保守区域，一个是位于一个区域位于N端第8个氨基酸和第11个氨基酸之间，保守序列为CPVC，另外一个保守区域在第68个氨基酸和第72个氨基酸之间，保守序列为SYPT。三级结构具有螺旋—转角—螺旋的DNA结合模体。第二段保守序列处于螺旋转角螺旋结构中，所以我们就对这个保守区域进行突变，通过观察体外和adhE基因上游启动子区域的结合情况来验证保守区域对蛋白功能的作用。