鸡源性大肠杆菌耐药性检测及相关耐药基因的研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 26次 | 上传用户:kangzeng
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鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希菌(E.coli)引起的传染病,给养鸡业造成严重的经济损失。本实验室对其进行耐药性和耐药基因的检测,以期为禽病临床提供理论依据。自河北省各地区典型大肠杆菌病症状的病、死鸡中分离出160株细菌,通过形态学、生化特性及PCR技术进行鉴定,确定其中111株为E. coli。参照NCCLS推荐的K-B药敏纸片法对111株E.coli分离株进行24种常用抗菌药物的敏感性试验,结果如下,⑴对氨基糖苷类药物链霉素、卡那霉素、庆大霉素、新霉素、阿米卡星和壮观霉素的耐药率依次为97.30%、96.97%、95.50%、50.45%、45.95%和22.52%;⑵对喹诺酮类药物氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、盐酸左氧、诺氟沙星和加替沙星的耐药率依次为99.10%、95.50%、93.69%、91.89%、90.09%和76.58%;⑶对β-内酰胺类药物头孢拉定、头孢噻肟、青霉素、氨苄舒巴坦和头孢曲松钠的耐药率依次为100%、100%、100%、94.59%和90.09%;⑷对大环内脂类药物红霉素、替米考星、阿奇霉素的耐药率依次为99.09%、96.40%和57.66%;⑸对林可霉素、利福平、强力霉素和氟苯尼考的耐药率分别为100.00%、100.00%、90.09%和81.98%。统计结果显示我省鸡源E.coli分离株100%呈多重耐药性,耐药现象严重。采用PCR方法,对111株E.coli分离株进行6种氨基糖苷类耐药(AMEs)基因的检测。结果显示,共有100(90.09%)株扩增出AMEs基因,6种基因aph(6′)-Id(strB)、ant(3′)-Ia(aadA)、aac(3’)-Ⅱa、aac(6′)-Ib、aph(3′)-Ⅱa、aph(3′)-Ib(strA)的阳性率依次为73.87%、41.44%、31.53%、26.13%、13.51%和8.11%。在111株中有11株为所测AMEs基因阴性,未见6种基因全携带者。采用PCR方法,对111株E.coli分离株进行4种喹诺酮类耐药质粒的检测。结果显示,共有100(90.09%)株扩增出耐药质粒,qnr A、qnrB、qnrS、aac(6′)–Ib-cr的阳性率分别为0%(0/111)、0.90%(1/111)、8.11%(9/111)、36.04%(40/111)。对其中40株E.coli GyrA基因中的氟酮耐药决定区(Quinolone-resisitant determiningregion,QRDR)进行PCR检测、测序、并进行序列分析,结果40株耐药菌中,QRDR基因在其编码的第83或/和87位氨基酸均发生突变,但在所检测菌株中未发现72、75位氨基酸突变的存在。GyrA基因突变为大肠杆菌耐喹诺酮类抗生素的一个重要机制。采用PCR方法,对111株E.coli分离株进行β-内酰胺类耐药基因的检测。结果显示,Oxa-1、Oxa-3、Oxa-5的阳性率分别为0%(0/111)、2.7%(3/111)及0.9%(1/111),可见Oxa型β-内酰胺酶不是河北地区E.coli耐β-内酰胺类药物的主要机制。
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