为了应对不断变化的环境,细菌进化形成了多种不同的分泌系统。这些分泌系统通过分泌功能多样的效应蛋白,使细菌能够从外环境中摄取营养物质、抵抗环境胁迫,并在与真核细胞、原核细胞的竞争中发挥作用,从而为细菌的生存和生长提供了有利的保障。细菌六型分泌系统（T6SS）是近几年发现的一种结构复杂的新型分泌系统,广泛存在于革兰氏阴性菌中,通常被认为是一种用于细菌间接触性竞争的武器,通过分泌效应蛋白作用于其他细菌从而使自身成为优势菌株;实验室前期的研究成果表明,细菌还能够利用六型分泌系统效应蛋白参与金属离子的摄取与转运,在抗氧胁迫、细菌致病性方面也发挥着重要作用。然而目前对T6SS分泌系统及其效应蛋白的了解依然非常有限,进一步探索T6SS分泌系统及其效应蛋白生物学新功能,将有助于加深对细菌分泌系统的认识,并对揭示细菌与宿主互作、细菌与细菌竞争及细菌与外环境物质交换等方面的作用机制具有重要意义。假结核耶尔森氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,其基因组上含有4套完整的T6SS分泌系统,本研究以假结核耶尔森氏菌T6SS3为研究对象,通过分泌鉴定、酶活检测、细菌竞争和GST pull-down等手段,初步探究了其T6SS基因簇中一个与绿脓杆菌素Pyocin高度同源的YPK＿0952效应蛋白的生物学功能,揭示了其在细菌种内竞争中的作用,进一步完善了对T6SS效应蛋白功能的认识,也为探索耶尔森氏菌感染疾病的防治提供了一种新的思路。主要的研究内容及结论如下:1.通过生物信息学分析,我们在假结核耶尔森氏菌基因组中发现一个未知功能的基因ypk＿0952,其编码产物N端含有T6SS效应蛋白的特征序列PAAR结构域,C端与绿脓杆菌素Pyocin S3具有高度的同源性。2.构建假结核耶尔森氏菌重组表达质粒pME6032-0952,通过在野生型菌株和T6SS突变株中过表达检测YPK＿0952的分泌,结果表明YPK＿0952是由六型分泌系统分泌的效应蛋白;并通过核酸水解酶活性检测,发现YPK＿0952是一个镁离子或者锌离子依赖的DNA水解酶。3.构建假结核耶尔森氏菌Δypk＿0952Δypk＿0953突变株,比较分析突变株和野生型菌株在细菌种内和种间竞争中的异同,结果发现ypk＿0952和ypk＿0953基因的缺失对假结核耶尔森氏菌种内竞争具有显著影响。4.通过GST pull-down和细菌双杂交进行互作蛋白的筛选与验证,发现假结核耶尔森氏菌YPK＿0952蛋白能够和YPK＿0953和膜蛋白OmpA相互作用。