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目的:研究玉郎伞多糖(YLSP)及其与拉米夫定组(YLSP/3TC)体内外抗乙型肝炎病毒的效果。方法:(1)体外抗HBV作用:体外研究以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞株为细胞模型,MTT法检测YLSP对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0);采用直接加药法进行实验,在最大无毒浓度(TC0)下,研究不同浓度的含YLSP及YLSP/3TC的培养基,对HepG2.2.15细胞株进行培养,于第72h和第144h分别收集不同组别的细胞培养上清液,以实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测其HBV DNA的载量,并以ELISA法检测其HBsAg和HBeAg的滴度。以HBV DNA,HBsAg和HBeAg作为药物抗HBV的重要观察指标,对YLSP及YLSP/3TC体外抗HBV作用进行评价。(2)体内抗DHBV作用:体内研究中,以1日龄感染DHBV广西麻鸭作为动物模型,7d后采用PCR法筛选出DHBV感染强阳性鸭。随机分为6组:YLSP高、中、低剂量组3个剂量组;YLSP/3TC剂量组;模型组和拉米夫定(3TC)阳性对照组。每组10只,各组雏鸭均持续灌胃给药14d。观察用药前(T0)、用药后7d(T7)、14d(T14)及停药3d(P3)后,鸭血清上清中DHBsAg、DHBeAg,DHBV DNA的表达以及转氨酶(ALT,AST)活性变化;同时在停药3d后,取新鲜肝组织,观察HE染色肝组织病理变化,并用新鲜肝组织匀浆,观察各剂量组肝匀浆液上清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量,从而评价YLSP及YLSP/3TC体内抗DHBV作用。结果:(1)体外抗HBV作用:①Y LSP在11.72mg/L浓度时,对HepG2.2.15细胞基本没有毒性。②在最大无毒浓度(TC0)下,不同浓度组别的YLSP及YLSP/3TC对HepG2.2.15细胞HBsAg及HBeAg的分泌和HBV DNA的合成均有显著的抑制作用,且抑制作用呈现明显的时效及量效关系;与YLSP组和3TC对照组相比,YLSP/3TC各剂量组对HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的抑制作用有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。③YLSP对HBsAg和HBeAg的TI分别为29.27和15.05,揭示YLSP安全性较好。(2)体内抗DHBV作用:用药7d(T7)、14d(T14)后,YLSP高、中剂量及YLSP/3TC组与模型组比较,鸭血清上清中DHBV DNA的含量,DHBsAg和DHBeAg的滴度,AST及ALT的活性均明显下降;且YLSP/3TC组与YLSP高剂量组和3TC对照组相比较,鸭血清上清中DHBV DNA的含量,DHBsAg和DHBeAg的滴度,AST及ALT的活性均明显低于YLSP高剂量组和3TC对照组。停药3d后,YLSP中、低剂量组及3TC组鸭血清上清中DHBV DNA的含量,DHBsAg和DHBeAg的滴度,AST及ALT的活性,均出现反跳现象,而反跳现象在YLSP/3TC组不明显,YLSP高剂量没有出现反跳现象。YLSP高、中剂量组及YLSP/3TC组与模型组对比,鸭肝匀浆上清中SOD和GSH-PX的活性与GSH的含量明显升高,MDA的含量明显降低。YLSP/3TC组鸭肝匀浆上清SOD和GSH-PX的活性与GSH的含量显著高于YLSP高剂量组和3TC对照组,YLSP/3TC组鸭肝匀浆上清MDA的含量显著低于YLSP高剂量组和3TC对照组;药物的抗病毒作用与剂量大小及时间相关。此外,鸭肝脏组织病理学检查发现YLSP及YLSP/3TC对DHBV引起的肝损伤有明显的保护作用,YLSP/3TC组保护作用更显著。结论:体内外,YLSP及YLSP/3TC抗HBV疗效显著,且毒性较低,同时还可以缓解DHBV所引起的鸭肝损伤,改善肝功能。YLSP与3TC组合不仅比二者单用有更强的抗病毒效果,而且对DHBV所致的鸭肝损伤也有更强的保护作用。