背景:动脉粥样硬化所致的心血管疾病是慢性肾衰竭患者常见的并发症和最主要的死亡原因。慢性肾衰竭患者体内存在血管内皮的氧化应激及其所致的“微炎症状态”,二者相互作用所致的血管内皮损伤是心血管疾病的病理基础。目前的研究证实,高浓度尿素是诱导机体产生ROS并导致氧化应激及血管内皮功能失常的重要致病因素,但具体机制不明。衔接蛋白p66shc是调控细胞氧化应激的关键蛋白,在高血糖、紫外线等多种病理因素所致血管内皮细胞的氧化应激及炎症发生中具有重要作用,而p66shc是否参与了尿素诱导内皮细胞氧化应激尚未见报道。因此,探讨p66shc在尿素诱导人脐静脉内皮细胞活性氧产生及炎症发生过程中的作用,可揭示慢性肾衰竭患者并发心血管疾病的病理机制。目的:观察尿素对人脐静脉内皮细胞活性氧水平的影响,以及细胞内p66shc表达部位及表达水平的改变,检测细胞内核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)转录因子的表达变化,探讨p66shc在尿素诱导人脐静脉内皮细胞活性氧产生及炎症发生过程中的作用及其机制。方法:体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为正常组,甘露醇对照组,尿素组。采用25 mmol/L的尿素在不同时间点(3 h,6 h,12 h,24 h)作用于体外培养的细胞,活性氧测定试剂盒检测细胞内ROS含量。免疫荧光法观察细胞内p-p66shc和NF-κB的表达部位。蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞中p66shc、p66shc-Ser36、NF-κB/p65和p-NF-κB/p65的表达水平。结果:与正常组和甘露醇对照组相比,25 mmol/L尿素作用人脐静脉内皮细胞1h后ROS含量明显增加(P<0.05),并随时间延长至3h而升高(P<0.05)。尿素作用3h后可见人脐静脉内皮细胞胞浆及胞核内均有p-p66shc的阳性表达,并且胞核内的p-p66shc表达水平强于胞浆;细胞内NF-κB/p65的表达明显增强。免疫印迹结果显示,尿素呈时间依赖性上调人脐静脉内皮细胞中p66shc蛋白表达及p66shc-Ser36的磷酸化水平,在24h时达到峰值(P<0.05);细胞中p-NF-κB/p65蛋白表达水平呈先增高后降低的趋势;尿素作用3 h、6 h后的细胞内p-p65蛋白表达水平明显增高,在12 h达到峰值,于24 h有所降低,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:p66shc在尿素诱导内皮细胞ROS产生过程中具有重要作用,二者相互作用并通过激活NF-κB/p65介导炎症的发生,可能是慢性肾衰竭患者并发心血管疾病的重要病理机制。背景:现代生活方式的改变是的主动或被动的睡眠剥夺大量出现,而睡眠剥夺引起机体能量消耗的增加与氧化应激密不可分。氧化应激可通过上调肿瘤坏死因子TNF-α等炎性因子的表达诱导炎症的发生。胰腺是参与机体能量调节的重要器官,睡眠剥夺引起的氧化应激对胰腺形态和功能的影响尚未见报道。探讨睡眠剥夺对胰腺的影响,可为改变不良生活方式,预防睡眠剥夺引起的胰腺损伤提供实验依据。目的:探讨睡眠剥夺对小鼠胰腺形态、功能的影响以及肿瘤坏死因子-α表达变化的病理意义。方法:将C57雄性小鼠随机分为正常对照组,睡眠剥夺24 h、48 h和60 h组,观察各组小鼠的精神活动状态及体重变化;检测血清淀粉酶水平;采用HE染色和免疫组织化学法观察各组小鼠胰腺的组织学特征及TNF-α表达情况;Western Blot检测TNF-α的表达水平。结果:随睡眠剥夺时间的延长,模型组小鼠体重较正常对照组明显下降(P<0.05)。AMS水平在睡眠剥夺24 h显著升高,48 h达到峰值后维持至60 h(P<0.01)。HE染色可见睡眠剥夺组小鼠出现胰岛细胞排列紊乱、胞质浓缩、细胞间隙扩大;外分泌部细胞酶原颗粒消失,细胞空泡化等病理改变;免疫组化及免疫印迹显示,睡眠剥夺组小鼠胰腺中TNF-α的表达随剥夺时间的延长而明显上调(P<0.01)。结论:睡眠剥夺后不仅导致小鼠全身衰竭,并通过活化TNF-α而诱导胰腺的炎症反应,导致其形态和功能损伤。