三重信号放大体系的构建及其应用于单分子水平检测多种microRNA的研究

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MicroRNA(miRNA)是小内源性非编码单链RNA,长度一般为19-23个核苷酸。MiRNA通过与靶基因的3-非翻译区(untranslated region,UTR)、5-非翻译区(UTR)或编码序列(coding sequence,CDS)区相互作用,介导转录后或翻译水平上的基因沉默,并降低靶信使RNA(mRNA)的稳定性,导致mRNA降解或抑制蛋白质翻译。MiRNA控制超过50%人类编码基因的活性,在广泛的生物过程中发挥关键作用。近年来,越来越多的证据表明,miRNA与人类疾病有关,
其他文献
生物体内的活性分子参与细胞生理病理活动、调控细胞功能,其含量水平的异常与疾病的发生发展密切相关。在大多数情况下,生理病理的变化过程与多种活性物质的同时改变密切相关,因此对多组分同时检测显得尤为重要。近些年来,虽然科研人员报道了众多多组分检测探针,但是此类探针往往具有合成步骤繁琐、提纯困难、合成方法不具普适性等问题,从而限制了这类探针的进一步应用。此外,相比于手术切除、放疗或者化疗等常见肿瘤治疗手段
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肝脏缺血再灌注(IR)损伤发生在肝脏移植或其他肝脏手术中,易造成细胞死亡和器官衰竭,是临床治疗中的常见并发症。线粒体作为有氧呼吸的主要场所,通过为细胞提供能量维持细胞正常生理功能并抵御IR损伤。在线粒体氧化磷酸化供能过程中,线粒体DNA(mt DNA)参与编码氧化磷酸化相关蛋白质,是细胞抵御IR损伤的重要支撑。可见,mt DNA的健康程度与IR损伤密切相关。而活性氧(ROS)是线粒体在氧化代谢过程
学位
细胞粘度(Cell Viscosity)是一项重要的微环境参数,对于维持细胞的正常生理功能(如生物分子间的信号传导,生物分子之间的相互作用,代谢物扩散以及细胞生长、凋亡、自噬等)具有重要意义。线粒体作为重要的亚细胞器,其粘度异常与多种疾病密切相关,如神经退行性疾病、动脉粥样硬化以及恶性肿瘤等。在复杂的细胞环境中,线粒体粘度通常受到多种因素的影响。活性氧(Reactive Oxygen Specie
学位
烯基叠氮是将碳碳双键和叠氮这两种官能团直接连接在一起而形成的结构特殊的烯烃类化合物。由于两者形成的共轭结构导致烯基叠氮具有高反应性和多反应位点。α-取代烯基叠氮作为其中重要的组成结构之一,且由于烯烃具有富电子性质,所以发展了多种反应类型:与亲电试剂反应、迈克尔加成反应、与自由基发生加成反应、与金属发生还原反应、与金属类碳化合物反应等。此外,叠氮官能团也能发生环加成反应、aza-Wittig反应,点
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线粒体是大多数真核生物中必不可少的细胞器,其功能包括能量供应、信号传递、细胞分化、细胞死亡以及维持对细胞周期和细胞生长的控制。线粒体中的任何损伤以及所导致的任何功能障碍都可能是导致一系列人类疾病的关键因素。研究表明,线粒体膜电位异常变化是引发线粒体功能障碍及线粒体相关疾病的重要因素。过氧亚硝酸根(ONOO~-)是一种具有较高活性的活性氧,有很强的细胞毒性,能够损害线粒体的结构与功能,使线粒体膜电位
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半胱氨酸组织蛋白酶是一类位于细胞溶酶体囊泡内的蛋白酶,其主要功能是介导蛋白质水解。作为组织蛋白酶家族的重要成员之一,组织蛋白酶B是唯一同时具有内肽酶和外肽酶活性的蛋白酶。它可以识别氨基酸特定位点肽键,使细胞粘附蛋白失活,激活其他蛋白酶(如层粘连蛋白),降解细胞外基质,并从实体肿瘤中释放转移细胞,实现癌细胞的侵袭和转移。组织蛋白酶B与多种疾病密切相关,如关节炎,心血管疾病、肺癌、结肠癌等。组织蛋白酶
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基因组氧化和烷基化是两种最重要的细胞毒性损害形式,会导致基因突变及各种人类疾病。人类8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶(human 8-oxo Guanine DNA glycosylase,h OGG1)和人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶(human alkyladenine DNA glycosylase,hAAG)是负责修复氧化和烷基化损害的两种主要的修复酶,然而二者异常活动会导致修复无法顺利进行,继
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蛋白酶是一类能够选择性地水解蛋白质和多肽中肽键的酶。人类基因组中编码的蛋白酶大约有600种,对人体生命活动具有调节作用。蛋白酶的活性还与多种人类疾病甚至癌症相关。因此,开发灵敏度高、选择性好的蛋白酶活性定量检测方法就显得尤为重要。传统的蛋白酶检测方法包括酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印迹、流式细胞术和质谱法等。这些方法往往涉及多个实验步骤,完成测定所需的时间也相对较长,还需要进行大量的样品预处理工作。
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癌症是21世纪人类疾病中最普遍也是最难治愈的一种慢性病。世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布报告显示,2020年新发癌症患者突破1930万例,死亡患者超过900万例。造成患者死亡的主要原因是诊断延误导致肿瘤的扩散。研究表明,肿瘤标志物(Tumor Marker,TM)的检测是临床早期发现肿瘤的重要方法,对提高治疗效果及降低治疗难度具有重要意义。近年来,纳米技术用于肿瘤标志物的检测已多有报道
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核酸扩增是靶信号放大最直接有效的方法。核酸等温放大在恒温下进行,不需要聚合酶链式反应所需的热循环条件。恒温扩增提供高扩增效率,各种恒温扩增策略已被用于灵敏检测各类生物标志物。在本论文中,我们以DNA糖基化酶和microRNA为模型发展了两种基于恒温扩增技术灵敏检测目标物的方法。本论文包括以下内容:1、基于多重循环酶修复扩增的混合-读取法快速灵敏检测DNA糖基化酶。我们构建了一种具有多重循环酶修复介
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