新疆地区犊牛呼吸道巴氏杆菌分子检测及分离株部分生物学特性研究

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目的:巴氏杆菌(Pasteurella)是一种重要的畜禽病原菌,能导致多种动物的急、慢性感染,给全球养殖业带来一定的经济损失。部分犊牛正常呼吸道也有巴氏杆菌的存在,然而存在于呼吸道的巴氏杆菌有何生物学特点、与病死牛巴氏杆菌分离株的区别和关系未见系统报道。因此本研究在对新疆南北疆地区13个规模化养殖场现场流行病学调查基础上,采集515份鼻拭子进行犊牛呼吸道巴氏杆菌的分子检测,分析分离株血清型及ST型,研究分离株致病性和耐药性等特点,为犊牛巴氏杆菌病溯源、有效防控和流行病学研究提供有意义的数据。方法:(1)犊牛呼吸道巴氏杆菌分子检测:采用现场调查、记录检索、实地勘察等对天山南北疆13个养殖场进行现场流行病学调查;基于巴氏杆菌特异性基因kmt PCR技术对样品中巴氏杆菌进行分子检测,分析新疆南北疆部分规模化养殖场犊牛巴氏杆菌的阳性检出率。(2)犊牛呼吸道巴氏杆菌分离鉴定及分型:采用常规细菌分离鉴定方法对PCR阳性鼻拭子进行细菌分离,通过16S rRNA和kmt序列分析鉴定细菌,采用PCR基因扩增法对分离株进行荚膜分型、脂多糖分型及MLST分型,并对三者之间的关系进行比较分析。(3)犊牛呼吸道多杀性巴氏杆菌的毒力、耐药基因及耐药表型检测与分析:采用PCR基因扩增方法对分离株已确定的主要毒力基因、耐药基因携带情况进行检测,采用微量肉汤稀释法对分离株耐药表型检测,同时进行动物感染实验,与引起感染的巴氏杆菌相应特点进行比较。结果:(1)新疆南北疆13个规模化养殖场饲养管理水平、巴氏杆菌发病史、流行病学史等对巴氏杆菌检出率均有影响。采集的515份鼻拭子中88份为PCR阳性,阳性率为17.09%(88/515)。扩增的kmt基因序列与Genbank中公布的巴氏杆菌参考菌株的相似性均在97%以上。(2)88份阳性鼻拭子中58份分离到巴氏杆菌,分离率为65.91%(58/88),经16SrRNA和kmt基因序列分析分离株为多杀性巴氏杆菌;分离鉴定的多杀性巴氏杆菌主要荚膜血清型:脂多糖血清型:ST型为A:L3:ST1型。(3)分离株具有明显的致病性,初步研究显示分菌株(Pm97、Pm78)致病力较高,肺脏组织学观察结果显示为肺泡充血、炎性渗出、肺泡融合、肺间质增宽;58株多杀性巴氏杆菌的2个毒力基因(psl、tbp A)携带率高达100%,均未检出hgbB、toxA基因。分离株对萘啶酸耐药率最高,其次是复方新诺明耐药、氯霉素和多粘菌素E;多杀性巴氏杆菌分离株的β-内酰胺类blaTEM携带率做高为18.97%(11/58),未检测出氨基糖苷类、四环素类、多肽类耐药基因。结论:新疆地区犊牛呼吸道多杀性巴氏杆菌检出率较高,分离株荚膜血清型、脂多糖型与病死牛多杀性巴氏杆菌分离株荚膜脂多糖分型存在一定差异;菌MLST型较为单一。分离株与病死牛多杀性巴氏杆菌分离株毒力基因携带情况在铁离子摄取相关基因、唾液酸激酶相关基因存在一定差异;分离株与病死牛多杀性巴氏杆菌均对喹诺酮类药物、磺胺类耐药较为明显。
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