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新孢子虫病是危害养牛业健康发展的重要原虫病之一,该病可垂直传播,主要造成妊娠母牛的流产、死胎以及新生儿的运动和神经系统障碍。目前尚无有效药物和疫苗防控该病的流行与发展,基因佐剂疫苗的研究为犬新孢子虫新型疫苗的研制开辟了新的思路。本试验根据发表的犬新孢子虫NcMAG1基因序列(EF580924.1)和牛IFN-γ基因序列(M29867.1),设计、合成了两组特异性引物,应用PCR技术分别扩增牛源犬新孢子虫NcMAG1和牛IFN-γ基因,SOE-PCR技术拼接NcMAG1和IFN-γ基因,将鉴定正确的NcMAG1-IFN-γ基因克隆到pMD18-Tsimple载体上,再将PCR和酶切鉴定正确的NcMAG1-IFN-γ亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体和pVAXI真核表达载体中,分别进行原核表达和真核表达,制备NcMAG1-IFN-γ融合蛋白亚单位疫苗和NcMAG1-IFN-γ融合基因核酸疫苗,接种BALB/c小鼠,应用间接ELISA方法和流式细胞术检测免疫小鼠的体液免疫水平和细胞免疫水平,评价疫苗的免疫应答效果。结果表明,PCR扩增NcMAG1基因片段大小为1047bp,IFN-γ基因片段大小为444bp,SOE-PCR扩增NcNcMAG1-IFN-γ融合基因大小为1491bp;成功构建了含有NcMAG1-IFN-γ融合基因的原核表达质粒pGEX-NcMAG1-IFN-γ和真核表达质粒pVAX-NcMAG1-IFN-γ。原核表达产物经SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析表达融合蛋白大小为82ku；真核表达产物经IFAT鉴定和Western-blotting分析,NcMAG1-IFN-γ融合基因在Vero细胞中表达,表达蛋白分子量为57ku,均具有较好的反应原性。NcMAG1-IFN-γ融合蛋白亚单位疫苗和pVAX-NcMAG1-IFN-γ核酸疫苗接种BALB/c小鼠后,均能诱导BALB/c小鼠产生较高的体液免疫水平和细胞免疫水平。本试验为新孢子虫病新型疫苗的研究奠定了基础。