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熊蜂传粉在自然生态系统和农业生产中发挥着重要作用。兰州熊蜂(Bombus lantschouensis)是近年来我国筛选出的本土优良蜂种,具有繁殖性状好、传粉效率高等优点。在兰州熊蜂繁育过程中,级型分化和蜂王产卵等影响蜂群发育的关键生物学过程的调控机制仍不明确,限制了兰州熊蜂的规模化繁育与传粉利用。MicroRNAs(miRNAs)在生物体早期发育、组织分化等诸多生物学过程具有重要的调控作用,然而miRNAs在兰州熊蜂蜂群生长发育过程中的调控作用有待进一步研究。本研究以兰州熊蜂为材料,基于高通量测序数据,利用生物信息学方法,对兰州熊蜂三个级型成年蜂头部、产卵与未产卵蜂王卵巢miRNAs进行预测和表达差异分析,使用荧光定量对差异表达显著miRNAs进行验证,并分析其功能。主要取得以下结果:(1)兰州熊蜂三个级型成年蜂头部miRNAs分析。以兰州熊蜂成年工蜂、雄蜂和蜂王的头部为材料,基于高通量测序数据分析三个级型头部miRNAs。结果表明,三型蜂头部共鉴定出364种已知miRNAs和89种新miRNAs;在雄蜂与蜂王、雄蜂与工蜂,工蜂与蜂王之间表达量达到显著差异水平的miRNAs分别有9种、14种和4种;三型蜂中头部表达量排名前8位的miRNAs相同,但不同级型的排列顺序有差异,说明miRNAs在熊蜂物种内具有高度保守性,同时,三型蜂之间又具有一定的特异性。miRNAs聚类结果显示,雄蜂与雌性蜂之间miRNAs表达水平差异较大,工蜂与蜂王之间miRNAs表达水平差异较小。GO富集分析与KEGG通路分析表明,三型蜂差异表达的miRNAs靶基因显著富集在催化活性、代谢过程和结合等生物学功能上,参与调控抗生素生物合成、嘧啶代谢和嘌呤代谢等通路。(2)兰州熊蜂产卵与未产卵蜂王卵巢miRNAs表达特性分析。以兰州熊蜂产卵与未产卵蜂王卵巢组织为材料,利用高通量测序结合生物信息学方法,分析不同状态蜂王卵巢miRNAs的特性。从兰州熊蜂蜂王卵巢中共鉴定出296种已知miRNAs和65种新miRNAs。产卵蜂王与未产卵蜂王之间表达差异达到显著水平的miRNAs共有15种。其中5种在产卵蜂王中上调,这些上调miRNAs可能与诱导细胞增殖、迁移和活化相关,具有调节细胞正常发育的作用;10种在产卵蜂王中下调,这些miRNAs可能参与调控生殖系干细胞衰老等过程。本研究预测出兰州熊蜂三个级型头部、以及产卵与未产卵蜂王卵巢的miRNAs特性,不同级型之间、不同生殖状态蜂王之间的miRNAs均具有显著性表达差异,这些差异表达的miRNAs可能参与发育和生殖相关的通路调控。本研究结果为深入探究兰州熊蜂miRNAs功能及其调控机制奠定了基础。