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鱼类病毒性神经坏死病(Viralnervousnecrosis,简称VNN)又称病毒性脑病和视网膜病(Viralencephalopathyandretinopathy,VER),是由鱼类病毒性神经坏死病毒(Viralnervousnecrosisvirus,简称VNNV,属于乙型野田村病毒属)引起的一种新的传染性疾病。是世界范围的一种鱼类流行性传染病,该病最早于1985年报道于日本,现已遍及非洲外的所有地方。该病临床上主要以鱼苗出现神经异常为特征,表现为不正常游泳:螺旋状游动、在水中打转、腹部向上浮于水面;组织病理以患病鱼中枢神经系统和视网膜中间层出现空泡为特征。中国台湾和广州分别从1997年和2001年开始报道此病,目前已对我国水产养殖业造成严重危害。国内关于VNNV的报道集中在病理切片和核酸序列分析上,而关于此病毒在条纹月醴细胞系(stripedsnakehead,SSN1)分离培养及理化特性方面的报道较少。
从福建厦门收集发病青斑病料经处理接种SSN1细胞,设定不同温度增值病毒。通过制备病理切片、观察细胞病变(cytopathiceffects,CPE)、PCR扩增VNNV部分核酸片段和电镜观察来确定分离物是否为VNNV。结果通过病理切片可以在病鱼视网膜中看到大量空泡化现象,接种的SSN1细胞在25℃培养2-3天表现出CPE,PCR检测结果为VNNV核酸阳性,电镜观察细胞切片显示有大量病毒粒子排列在感染的SSN1细胞质中,负染可以看到其为直径25-30nm的二十面体,无囊膜。综上表明所分离的为VNNV。随后对其一些特性进行研究。该病毒在SSN1细胞中25℃时滴度可以达到105.1/0.1mL,石斑鱼吻端细胞系(grouperproboscis,GP)、鲤鱼上皮瘤细胞系(epithelimapopuasumcuprini,EPC)、肥头鲤细胞系(pimephalespromelas,FHM)在28℃、25℃、20℃时对该病毒都没有CPE,且PCR检测VNNV核酸为阴性。病毒经55℃30min、pH=3和pn=11各1h处理后下降2个滴度,经氯仿处理后滴度不变。以上说明GP、EPC、FHM这些细胞对该病毒都不敏感;该病毒对热(55℃30min)和酸碱(pH=3和pH=11)都比较敏感;对氯仿不敏感说明病毒没有囊膜,符合VNNV的形态特征。
此研究从VNNV培养温度及SSN1细胞培养环境等方面为制定细胞分离培养VNNV规程提供了一定的数据依据,具有一定的诊断意义。另外这是在我国首次借助SSN1细胞报道了VNNV的理化特性,为养殖场环境控制提供了一定的理论依据。