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高尿酸血症(hyperuricemia)是一种嘌呤代谢障碍疾病,近年来发病率迅速增加。目前,安全、有效、经济、副作用小的高尿酸血症治疗药物较少。我国有丰富的中药资源,中药安全有效,一直是新药研发的重要来源,从中药资源筛选治疗高尿酸血症的药物并研究其体内作用机制具有重要的意义。 本研究首先建立了一种筛选超氧阴离子清除剂的新方法并测定了多种中药的活性;还运用离心超滤质谱法筛选了中药复方二妙丸中抑制黄嘌呤氧化酶的活性成分;结合课题组前期实验结果,对二妙丸、黄柏、苍术、卷柏和虎杖治疗高尿酸血症大鼠的整体作用机制进行代谢组学研究并将主要代谢物进行定量,阐明了以上中药治疗高尿酸血症大鼠的作用机制。主要结果概况如下: 1.建立一种测定超氧阴离子清除能力的方法,该法简单、快速、灵敏度高。我们运用此法测定了生物样品和中药提取物的超氧阴离子清除能力。在所测的27种中药中,五味子的超氧阴离子清除能力最好,银杏叶、刺五加叶、知母、山茱萸、葛根、黄芩和山楂叶也都是很好的超氧阴离子清除剂。 2.采用离心超滤质谱技术从中药复方二妙丸中筛选并鉴定出9种与黄嘌呤氧化酶相互作用的化合物,分别为黄柏碱、木兰花碱、莲心季铵碱、蝙蝠葛仁碱、巴马汀、非洲防己碱、药根碱、小檗红碱及小檗碱。其中巴马汀、小檗红碱、小檗碱与黄嘌呤氧化酶作用较强,结合强度均在10%以上。 3.采用基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术的代谢组学方法研究中药治疗高尿酸血症大鼠的作用机制。运用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)的方法对正常大鼠、高尿酸血症模型大鼠和给药组(二妙丸组、黄柏组、苍术组、卷柏组和虎杖组)大鼠尿中的内源性代谢物进行分析,寻找并鉴定了与中药治疗高尿酸血症相关的潜在生物标记物。 4.采用超高效液相色谱-三级四极杆质谱仪(UPLC-TQ-MS)联用法定量健康组、模型组和给药组大鼠尿液中13个主要潜在生物标记物包括黄尿酸、犬尿酸、吲哚-3-羧酸、肌酐、胞嘧啶、马尿酸、尿苷、硫酸吲哚酚、辛二酸、癸二酸、尿囊素、3-羟基-2-氨基苯甲酸和尿酸。所建方法灵敏、快速、重现性好、准确度高。定量结果表明,第四章中筛选出的潜在生物标记物准确可靠;二妙丸对高尿酸血症大鼠的治疗作用好于其单味药黄柏和苍术,且苍术比黄柏药效要好;虎杖对高尿酸血症大鼠的治疗作用优于卷柏。