流感病毒分为A、B、C三种类型，其中唯有A型流感病毒能引起流感大流行。2009年暴发的甲型H1N1流感迅速扩散至全球200多个国家和地区，对公共卫生安全构成严重威胁。尽管甲型H1N1流感大流行已经结束，但在后甲流时代，我们仍然不能放松对该病毒的监测和研究，以防该病毒通过变异衍化成新的大流行株，威胁人类生命健康。A型流感病毒的变异包括抗原性、致病性、耐药性和传播能力的变异。本研究以小鼠作为哺乳动物模型，重点探讨了2009大流行流感病毒的抗原性与致病性变异特点，并初步建立了该病毒的反向遗传操作系统。随着病毒的不断流行和疫苗接种，人群体抗体覆盖率会不断增加，而该压力是否会促进2009大流行流感病毒流感的抗原性变异以逃避机体免疫系统清除尚有待研究；另外，临床中发现部分感染患者呈现重症表现，序列分析结果提示部份变异病毒可能具有更高的致病性。因此，研究抗体选择性压力下甲型H1N1流感病毒的变异规律，将有助于我们从分子水平上探究该病毒的抗原性和致病性变异机制及趋势，为该病毒的防控工作提供指导和借鉴。本研究在对实验室分离的甲型H1N1流感病毒野毒株XD株的全基因组序列分析的基础上检测了病毒对BALB/c小鼠的致病性，并将XD野毒株在灭活甲型H1N1流感病毒免疫小鼠体内连续传代，制备变异毒株。同时以经未免疫小鼠传代后的病毒作为对照病毒株。以抗原相关系数、小鼠半数致死量、体重变化率和幸存率作为评价指标来评价该病毒变异情况。结果发现，XD野毒株通过鼠肺连续传代，其致病性和抗原性会发生变异，在抗体选择性压力下，该病毒的抗原性会发生较大变化，抗原相关系数变为0.35，致病性提高18倍，而在无抗体压力下，该病毒的致病性可提高1000倍。为探索该病毒变异的分子基础，本研究以抗原性或致病性发生显著变化的变异毒株为研究目标，进行变异相关氨基酸位点的鉴定研究，通过序列分析比对，初步筛选出变异相关氨基酸位点，其中与病毒抗原性变异相关的关键氨基酸位点包括HA-S183P、HA-N156D、HA-D222G和HA-R223Q；而与病毒致病性增强相关的关键氨基酸位点包括PB1-R296T、PA-I94V、NP-D375N、HA-N156D、HA-D222G和HA-R223Q。本研究搭建了甲型H1N1流感病毒UIXD-P18-2-E1强毒反向遗传操作平台，成功拯救出病毒rUIXD-P18-2-C1。评价其生物学特性后发现，该拯救病毒与亲本毒株UIXD-P18-2-E1的生物学性状相同。该套反向遗传系统的成功建立为进一步研究该株甲型H1N1流感病毒变异的分子机制奠定了基础。