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第1章:胶质母细胞瘤中CD34阳性微血管模式与预后关系目的:通过K-Means聚类分析胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)中不同CD34+微血管生成模式(microvascular patterns,MVPs),并探讨不同MVPs分类与预后关系。方法:应用CD34免疫荧光染色对61例胶质母细胞瘤患者肿瘤组织中的MVP进行分类,测定肿瘤微血管面积百分比(the percentage of microvascular area,MVA%),使用K-Means聚类分析法对MVP特征进行分类,Kaplan-Meier法描绘生存曲线,Log-rank检验进行单因素生存分析,COX比例风险回归模型进行多因素预后分析。结果:胶质母细胞瘤肿瘤组织中CD34+微血管表型可以分为4种:芽生血管(microvascular sprouting,MS)、簇样增生血管(vascular cluster,VC)、花环样血管丛(vascular garland,VG)及肾小球样血管团(glomeruloid vascular proliferation,GVP),各微血管表型的MVA%存在异质性。通过分析每种表型的构成比,我们发现MS与VC含量少的胶质母细胞瘤含有丰富的VG与GVP,反之亦然。基于这些特征经聚类分析可将胶质母细胞瘤的MVPs划分为两类,I类以芽生血管、簇样血管增生为主;而II类则以花环样血管丛、肾小球样血管团增殖为主。二者的预后差别较大,单因素分析显示I类MVP的患者的整体生存期(overall survival,OS)和无进展生存期(progression-free survival,PFS)明显优于于II类MVP的患者(P<0.05);多因素分析提示MVP的类型是影响胶质母细胞瘤PFS与OS的独立预后因素(P<0.05)。结论:胶质母细胞瘤的CD34阳性MVPs存在明显的异质性,可以简单地分成两类,其中VG、GVP构成为主的II类MVP患者的预后较由MS、VC构成为主的I类者预后差。病理构造目的:了解胶质母细胞瘤在不同的微血管模式中血管周niche的病理构造,为体外模拟胶质瘤niche提供相关参数。方法:通过多重免疫荧光方法检测CD34、CD133、Nestin、α-SMA、GFAP、CD14在脑胶质母细胞瘤肿瘤组织血管周niche中的表达,探索芽生血管、簇样增生血管、花环样血管丛、肾小球样血管团等4种不同的微血管模式旁niche(MVPN)的结构特征及各种细胞分布情况,并测定各个标记物的面积占比,画出相关的模拟图。结果:在MS、VC模式中CD34、CD133和Nestin表达明显低于VG、GVP模式(P<0.05),α-SMA随着血管异质性程度的增加其在微血管周的表达明显增强(P<0.05),而GFAP、CD14在四种血管模式中表达无差别(P>0.05)。结论:血管周niche构造核心是内皮细胞与胶质瘤干细胞;以四种不同MVPs分类的血管周niche病理结构及细胞分布存在明显的差异,可以为体外模拟胶质瘤niche提供数据参考。第2章:基于不同微血管模式分析胶质母细胞瘤血管周niche的第3章:通过MALDI质谱成像方法探究胶质母细胞瘤中不同微血管周niche的多肽蛋白分布目的:探究胶质母细胞瘤中不同的微血管模式中血管周niche的肿瘤标志物分布特点,为进一步了解胶质瘤血管周niche结构。方法:通过免疫荧光方法检测CD34阳性微血管在脑胶质母细胞瘤中的表达情况并分类,应用Autoflex MALDI—TOF质谱仪在质荷比1000-10000范围内对脑胶质母细胞瘤组织切片进行质谱扫描,对MVPs分类后的胶质母细胞瘤质谱数据进行统计学分析。挑选出存在表达差异的多肽蛋白分子进行质谱成像,观察不同质荷比的多肽蛋白分子在脑胶质母细胞瘤不同的微血管模式血管周niche中的分布情况。结果:经荧光全景图及质谱成像图分析对比显示在MS、VC血管模式中质荷比为3240和3265的两个多肽蛋白分子明显含量较VG、GVP血管模式中高,而与之相反,质荷比为1037和8960的两个多肽蛋白分子在MS、VC血管模式中含量较低。结论:MALDI—TOF质谱成像技术可用于胶质母细胞瘤不同MVPs模式下多肽蛋白表达差异研究,初步建立了以无标记分析不同血管周niche组织结构及差异多肽蛋白分布研究。