马铃薯 Y病毒（Potato virus Y, PVY）编码的辅助成分蛋白酶（helper component proteinase, HC-Pro）被证明参与病毒的蚜传、基因组扩增、症状表达以及抑制RNA沉默等过程。利用酵母双杂交系统，我们从番茄cDNA文库中筛选出了一个与HC-Pro有相互作用基因，该基因推定的编码氨基酸序列与OPA3同源，我们称之为OPA3-like。　　目的：分析 OPA3-like蛋白的生物信息学功能，获得高效表达的番茄 OPA3-like融合蛋白，为OPA3-like抗体的制备及后续实验做准备；确定OPA3-like的亚细胞分布；通过转基因技术获得 OPA3-like过量表达及基因沉默的植株，对研究OPA3-like与PVY侵染关系的建立是否存在影响奠定基础。　　方法：利用 Vector NTI和ExPASy, SignalP，Plant-mPLoc等在线工具对OPA3-like蛋白基本理化性质、信号肽、跨膜区及亚细胞定位进行分析；构建原核表达载体pET22b-OPA3-like、pET28a-OPA3-like、pET32a-OPA3-like，并分别转化至大肠杆菌 BL21(DE3)和 Rosetta(DE3)中，进行 OPA3-like基因的原核表达；构建OPA3-like蛋白的 C端和 N端分别与 GFP融合的亚细胞定位载体pSP-OPA3-like-GFP和pCBGFP-OPA3-like，分别遗传转化烟草，激光共聚焦下观察目的蛋白定位情况；构建OPA3-like的过表达载体pBP-OPA3-like遗传转化烟草和番茄，RNAi表达载体pBRi-OPA3-like遗传转化番茄。　　结果与结论：（1）生物信息学分析显示，番茄OPA3-like蛋白存在稀有密码子，含有跨膜区，其N端有叶绿体定位信号序列，因此番茄OPA3-like蛋白可能是定位于叶绿体的膜蛋白。（2）构建了三个原核表达载体并分别转化至BL21(DE3)和Rosetta(DE3)菌，其中Rosetta(DE3)可提供稀有密码子，诱导表达后发现，对于同一重组载体而言，融合蛋白在两种菌中的表达量无明显差别，说明稀有密码子不是影响其表达的重要因素；转化 pET22b-OPA3-like无融合蛋白的表达，转化pET28a-OPA3-like可表达20kDa大小的融合蛋白；转化pET32a-OPA3-like的表达菌经诱导后获得的融合蛋白（37kDa）表达量最高，说明不同的载体所具备的蛋白质标签和启动子不同影响蛋白的表达， pET-32a(+)中的硫氧还蛋白（Thioredoxin A, TrxA)作为融合蛋白，使得OPA3-like融合蛋白的表达量较高；可溶性分析表明融合蛋白主要以包涵体形式存在。（3）获得的含有GFP-OPA3-like和OPA3-like-GFP融合表达的转基因烟草中，番茄OPA3-like都主要定位在叶绿体，其中OPA3-like的N端与GFP序列相连的融合蛋白有部分定位在保卫细胞膜上，这可能是GFP影响了OPA3-like蛋白N端的叶绿体定位信号。（4）构建了OPA3-like过表达载体和RNAi表达载体，获得了OPA3-like基因沉默的番茄；获得了OPA3-like过量表达的番茄和烟草，其中转基因烟草与野生型相比，出现幼叶的叶脉颜色加深，形成明显脉带，成熟叶色泽不均，花瓣颜色深，雌蕊柱头颜色浅的表型差异，推测OPA3-like可能参与色素的合成。