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哈维氏弧菌是一种栖息在水生和海洋环境的革兰氏阴性细菌，影响许多水产养殖动物。它是甲壳类动物和诱导养殖对虾发光弧菌病的病原体，它也是一种鱼类病原菌，感染多种物种，给海水养殖业带来严重的经济损失。目前，水产养殖控制弧菌病主要是依赖抗生素，但由此带来的各种副作用如细菌耐药性，环境污染相关联以及食品安全危害日益明显。近几年，人们转向了从基因工程方向来防治弧菌病。生物体在代谢过程中会产生少量的自由基，体内的抗氧化系统（抗氧化剂和酶类）能及时清除从而维持自由基代谢平衡。在生物体内，常规生理浓度的活性氧（ROS）是维持正常细胞生理功能所需的，而过量的ROS则会对生物分子造成伤害。超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GR）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽硫转移酶（GST）等组成了体内微型抗氧化系统，在维持生物体内活性氧（ROS）的平衡具有非常重要的作用，能有效保护细胞免受氧化损伤。本研究通过同源引物从哈维氏弧菌ZJ0603基因组扩增得GST和GPx基因ORF，将两个基因分别克隆pMD-18T载体测序，并进行生物信息学分析。GST基因ORF全长615bp，编码204个氨基酸组成的蛋白质。氨基酸序列经过Blast对比，该基因与Owensii弧菌、轮虫弧菌、坎贝尔弧菌的序列相似性分别为99%、99%、97%。GPx基因ORF除去信号肽全长477bp，编码158个氨基酸组成的蛋白质。氨基酸序列经过Blast对比，该基因与Owensii弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌的序列相似性分别为99%、99%、97%。将两个基因分别亚克隆到原核表达载体pET-28（a+），构建原核表达质粒pET-GST和pET-GPx，且在大肠杆菌BL21（DE3）中获得大量表达。GST在37℃、4小时、IPTG浓度0.08mmol/L表达量达到最高；而GPx在37℃、6小时、IPTG浓度0.1mmol/L表达量达到最高。通过镍亲和层析分离纯化GST、GPx蛋白，SDS-PAGE分析表明，纯化的蛋白为单一条带，分子量分别为28.2kDa和22.2kDa。通过腹腔注射纯化的重组GST、GPx蛋白免疫斜带石斑鱼，5周后用致病性V.harveyi进行人工感染试验，对斜带石斑鱼的免疫保护率分别为72.5%、77.5%；ELISA检测结果表明，所有试验组鱼都可检测到抗体，而且在第35d抗体达到峰值，表明这两个基因具有较好的免疫保护效应。针对哈维氏弧菌GST、GPx基因分别构建真核表达质粒pcDNA-GST和pcDNA-GPx，并通过肌肉注射斜带石斑鱼。并通过从DNA水平和mRNA水平检测两种质粒在鱼体组织内的表达分布情况。结果显示：免疫接种后的7d和28d，注射点周边肌肉、肝、鳃、头肾和脾脏组织均有目的基因表达；ELISA和Western-blot结果表明，鱼血清内存在抗体，说明两种DNA疫苗免疫后鱼体表达了目的蛋白，并诱导产生了相应抗体。在攻毒试验中，重组质粒pcDNA-GST和pcDNA-GPx免疫保护率分别是80%和82.5%。