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目的:探讨Oct4B1基因过表达是否增强结直肠癌SW620细胞对化疗药物奥沙利铂的耐药性,及其机制是否与诱导细胞上皮间质转化(EMT)有关。方法:(1)实验分组实验组(SW620-Oct4B1):转染带G418抗性的Oct4B1过表达质粒;对照组(SW620-NC):转染带G418抗性的阴性对照质粒。(2)稳定转染细胞株构建瞬时转染后48h,用RT-q PCR检测两组细胞Oct4B1 m RNA表达,明确瞬时转染效果;用G418筛选建立稳定转染细胞株,用RT-q PCR检测稳定转染细胞Oct4B1 m RNA表达,明确稳定转染效果,稳定转染细胞株用于后续实验。(3)对两组细胞分别作如下检测:(1)MTT法检测细胞对化疗药物奥沙利铂的敏感性;(2)用划痕实验检测细胞迁移能力;(3)用Transwell小室检测细胞侵袭能力;(4)用Western blot法检测细胞EMT相关标记物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达及耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达。结果:(1)稳定转染细胞株建立结果:瞬时转染48h后Oct4B1 m RNA表达实验组较对照组提高了1.28倍;用800μg/ml的G418建立稳定转染细胞株,稳定转染细胞Oct4B1 m RNA表达水平实验组较对照组提高了2.1倍,实验组明显高于对照组(P<0.01)。(2)对稳定转染实验组及对照组细胞检测结果如下:(1)奥沙利铂对两组细胞抑制率的结果显示:随奥沙利铂浓度增加,对两组细胞的抑制率也增加,但实验组较对照组细胞抑制率均明显降低(P<0.05);(2)划痕实验结果显示:培养12h两组在划线处伤痕愈合率分别为(32.67±0.67)%及(24.00±1.15)%,实验组明显高于对照组(P<0.05);24h两组在划线处伤痕愈合率分别为(67.33±1.20)%及(50.00±2.88)%,实验组显著高于对照组(P<0.05);(3)细胞侵袭能力结果显示:培养24h两组穿膜细胞数分别为(397.30±11.85)及(202.30±14.68),实验组显著多于对照组(P<0.01);(4)EMT标志物结果显示:两组细胞上皮标志物E-cadherin表达分别为(0.20±0.02)及(0.53±0.01),实验组明显低于对照组(P<0.01);而间质标志物N-cadherin表达分别为(0.93±0.02)及(0.67±0.02),实验组显著高于对照组(P<0.01);(5)耐药蛋白P-gp结果显示:两组P-gp表达分别为(0.42±0.02)及(0.11±0.01),实验组明显高于对照组(P<0.01)。结论:Oct4B1基因过表达能增强结直肠癌SW620细胞对化疗药物奥沙利铂的耐药性,其耐药机制可能与诱导细胞发生EMT过程以及增加P-gp表达有关。