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目的:对人子宫内膜细胞进行体外培养,应用不同浓度G-CSF作用于细胞,观察其对人子宫内膜细胞增殖情况的影响并研究其作用机制。方法:1采用胶原酶I消化和离心法在体外分离和培养原代人子宫内膜上皮细胞和基质细胞并传代,采用光学显微镜、倒置相差显微镜观察人子宫内膜细胞的形态和结构;用免疫细胞化学方法鉴定人子宫内膜上皮细胞和基质细胞;2用MTT法观察不同浓度(0pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、800pg/ml、1000pg/mL)G-CSF对上皮细胞和基质细胞分别作用24h、48h、72h的影响,挑选最适浓度和时间作为后续实验组;3用免疫荧光和免疫细胞化学方法鉴定细胞的G-CSF受体;4采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative RT-PCR))方法检测实验组与对照组PCNA基因和SLP基因mRNA表达水平,并比较两组间的差异;5应用Western-blot检测实验组与对照组β-catenin蛋白的表达水平,并比较两组间的差异。结果:1.经0.2%I型胶原酶消化并离心后的子宫内膜上皮细胞和基质细胞的分离成功率均分别>90%。经免疫细胞化学染色后,上皮细胞胞质对角蛋白抗体呈阳性反应,基质细胞胞质对波形蛋白抗体呈阳性反应。2.MTT实验显示人子宫内膜上皮细胞在G-CSF>500pg/ml的浓度下体外培养48小时,细胞存活率最高。子宫内膜基质细胞在G-CSF为500pg/ml的浓度下体外培养72小时,细胞存活率最高。3.采用免疫荧光检测G-CSF受体显示上皮细胞呈阳性反应—红色荧光,基质细胞呈阳性反应—绿色荧光。免疫细胞化学方法显示上皮细胞和基质细胞均呈棕黄色。说明上皮细胞和基质细胞中都存在G-CSF受体。4.采用RT-PCR检测到实验组上皮细胞和基质细胞的PCNA和SLP mRNA相对表达量均较对照组升高。5.采用Western-blot检测到实验组上皮细胞和基质细胞的β-catenin基因蛋白相对表达量均较对照组升高。结论:1.人子宫内膜上皮细胞在G-CSF>500pg/ml的浓度下体外培养48小时,细胞存活率最高。子宫内膜基质细胞在G-CSF为500pg/ml的浓度下体外培养72小时,细胞存活率最高。2.子宫内膜上皮细胞和基质细胞中均存在G-CSF受体,G-CSF是通过促进上皮细胞和基质细胞中PCNA基因和SLP基因的表达、调高Wnt信号通路上β-catenin蛋白的表达从而促进内膜细胞增殖的。