研究背景慢性浅表性胃炎是常见的消化系统疾病之一,一般人群发病率高达80%,可由饮食不节、幽门螺旋杆菌感染、饮酒、药物损伤、情绪刺激等引起。慢性浅表性胃炎反复发作、久病难愈,如不及时采取干预治疗,易发展为慢性萎缩性胃炎甚至胃癌。临床病例显示,慢性浅表性胃炎患者临床辨证为脾虚证的数量多、概率大,已成为一种相对固定的病证模式。虽有文献报到,气虚体质可能是脾虚证的生理基础,气虚体质在特定病因的作用下易发展为慢性浅表性胃炎脾虚证,但目前关于气虚体质与慢性浅表性胃炎脾虚证之间内在关联的生物学基础还知之甚少,特别是缺少基于大数据支持的生物标志物。研究目的本研究采用非标记定量蛋白质组学技术（Label-free）,以平和体质健康人群为对照,寻找气虚体质人群及慢性浅表性胃炎脾虚证患者的血清差异蛋白,并寻找气虚体质和慢性浅表性胃炎脾虚证共有的血清差异蛋白,对这些共有的血清差异蛋白进行Gene Ontology（GO）和京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）pathway富聚分析,以期寻找潜在的血清蛋白标志物,并探究气虚体质与慢性浅表性胃炎脾虚证之间的内在生物学关联。研究方法以中华中医药学会2009年实施的《中医体质分类与判定》、2002年《中药新药临床研究指导原则》和2004年中华医学会消化内镜分会提出的“慢性胃炎内镜分型分级标准及治疗的试行意见”以及《2012年上海中国慢性胃炎共识意见》为标准,纳入平和体质健康人3例、气虚体质健康人3例及慢性浅表性胃炎脾虚证患者3例,并采集受试者血清,用Bradford法对血清中的总蛋白进行质量检查,使用Label-free对血清中的蛋白进行定性和定量检测。同时,使用MeV软件对鉴定的差异血清蛋白进行聚类分析,使用生物信息学与进化基因组学在线软件（Venndiagrams）对鉴定的差异蛋白进行集合分类,并使用GOTermFinder软件对鉴定出的显著性差异蛋白进行GO功能注释和富聚分析,同时使用KEGG对差异蛋白进行代谢通路富集分析,确定差异蛋白可能参与的生化代谢途径和信号转导途径。研究结果受试者纳入及血清样本质量鉴定本实验在北京地区招募平和体质健康人3例,气虚体质健康人3例,于北京中医药大学东方医院招募就诊符合慢性浅表性胃炎脾气虚证诊断标准的患者3例,共计9例受试者。所有受试者均签署知情同意书,并自愿配合所有问卷调查、身体检查项目和血清样本采集工作。9例血清总蛋白样本提纯后均保存完好无降解,纯化后的蛋白总量可以满足至少一次Label Free非标记定量蛋白组学检测。全部血清蛋白样本质检合格。血清蛋白质组学研究9例送检血清蛋白样本经Label-free定量蛋白组学定性分析,共鉴定出蛋白质623种。其中平和体质健康人（A组）检出322种蛋白,气虚体质健康人（B组）检出504种蛋白,慢性浅表性胃炎脾虚证患者血清（D组）检出498种蛋白。经Label-free定量蛋白组学定量分析,平和体质健康人（A组）与气虚体质健康人（B组）相比,共鉴定出216个差异蛋白（差异倍数≥1.2或差异倍数≤0.833）,显著性差异蛋白24个（p<0.05）,16个显著性上调蛋白,8个显著性下调蛋白;平和体质健康人（A组）与慢性浅表性胃炎脾虚证患者（D组）相比,共鉴定出214个差异蛋白（差异倍数≥1.2或差异倍数≤0.833）,显著性差异蛋白28个（p<0.05）,22个显著性上调蛋白,6个显著性下调蛋白。血清蛋白生物信息学分析对Label-free鉴定出的差异蛋白进行聚类分析,结果显示,经实验三筛选出的差异表达蛋白能够将平和体质健康人、气虚体质健康人及慢性浅表性胃炎脾虚证患者三类人群分开,具备合理性及准确性。对差异蛋白进行GO富集分析,与平和体质健康人组相比,气虚体质健康人的差异蛋白主要富集到:细胞代谢过程的负调控、氮复合物代谢过程的负调控、免疫系统过程的负调控、蛋白质代谢过程的负调控以及脂质转运等生物过程上;慢性浅表性胃炎脾虚证患者的差异蛋白主要富集到:蛋白水解的调节、蛋白质激活级联反应调节、细胞代谢过程的负调控、催化活性的负调控以及免疫系统过程的负调控等生物过程上。对差异蛋白进行KEGG pathway富集分析,结果显示,与平和体质健康人组相比,气虚体质健康人的差异蛋白主要参与的信号通路为:补体和凝血级联反应、百日咳和甲状腺激素合成等;慢性浅表性胃炎脾虚证患者的差异蛋白主要参与的信号通路为:补体与凝血级联反应、朊病毒病和系统性红斑狼疮等。将两组显著性差异蛋白进行重叠,发现10种共有的显著差异蛋白,其中C4BPB,GPLD1和MS-F1 light chain variable region,无论在气虚体质健康人还是慢性胃炎脾虚证患者中,相比于平和体质健康人都显著上调,且呈依次上升的趋势。在同期开展的慢性萎缩性胃炎脾虚证、湿热体质和湿热证的验证中,C4BPB仅在气虚体质和脾虚证组有显著性表达,湿热组无显著性表达,GPLD1和MS-F1 light chain variable region的表达量无规律。功能分析发现,C4BPB主要参与凝血,补体激活经典途径和先天免疫应答等过程的负调控,特别的它可以抑制补体C3转化酶（C4bC2a）的形成并加速C3转化酶的降解,还可以辅助Ⅰ因子促进补体C4b片段的降解,从而阻断补体激活经典通路,降低机体先天免疫力。结论（1）在平和体质-气虚体质-CSG脾气虚证这一脾虚证发生发展的过程中,蛋白C4BPB在血清中的的表达量具有连续上升的趋势,在湿热体质及湿热证人群中则无显著性差异表达。且蛋白C4BPB参与机体先天免疫系统中补体激活经典途径的负调控,血清中C4BPB表达量越高,机体涉及补体的先天免疫能力越弱,符合气虚/脾虚证人群易患感冒、病后康复缓慢等特点,认为蛋白C4BPB可能是气虚体质及CSG脾虚证人群的血清蛋白标志物。（2）本研究对不同体质类型人群的血清蛋白进行聚类分析,能够将同一体质类型聚类到一起,将不同体质类型的人分开,为中医体质学三个关键科学问题之一的“体质可分”理论提供了大数据支持。（3）本研究确认了气虚体质及慢性浅表性胃炎脾气虚证的血清蛋白在细胞代谢负调控、免疫系统负调控、补体和凝血级联反应等生物过程和信号通路的一致性和递进性,为中医体质学三个关键科学问题之一的“体病相关”理论提供了大数据支持。