NK-lysin通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肝癌细胞侵袭与转移的研究

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目的:旨在研究课题组自主设计、体外表达的重组猪源NK-Lysin通过Wnt/β-catenin信号通路对人类肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移抑制的分子机制。方法:通过MTT检测法筛出重组蛋白NK-Lysin在肝癌细胞SMMC-7721的安全浓度;分对照组、PBS组和NK-Lysin组开展研究,其中,对照组为只加培养液,PBS组为只加培养液和PBS缓冲液,NK-Lysin组分别为含40μg/mL,20μg/mL和10μg/mL NK-Lysin的溶液。通过细胞划痕实验、黏附实验和侵袭实验检测NK-Lysin对SMMC-7721细胞侵袭和转移的情况;通过荧光定量PCR和Western blot检测SMMC-7721细胞的β-catenin和MMP-2 mRNA和蛋白表达量的变化。结果: ①细胞划痕实验结果显示:与对照组细胞的迁移能力相比,NK-Lysin不同浓度组细胞的迁移能力均下降,差异显著(P<0.001),PBS组细胞的迁移能力无显著差异(P>0.05)。②细胞黏附实验结果显示:与对照组细胞的黏附能力相比,NK-Lysin不同浓度组细胞的黏附能力均减弱,差异显著(P<0.001), PBS组细胞的黏附能力无显著差异(P>0.05)。③细胞侵袭实验结果显示:与对照组细胞的侵袭能力相比,NK-Lysin不同浓度组细胞的侵袭能力均下降,差异显著,分别为40μg/mL和20μg/mL(P<0.001), 10μg/mL (P<0.01)。PBS组细胞的侵袭能力无显著差异(P>0.05)。④荧光定量PCR结果显示:与对照组细胞的P-catenin和MMP-2 mRNA表达量相比,NK-Lysin不同浓度组细胞的β-catenin和MMP-2 mRNA表达量明显下调,差异显著,分别为:40μg/mL (P<0.001),20μg/mL (P<0.01), 10μg/mL (P<0.05)和(P>0.05), PBS组细胞的β-catenin和MMP-2 mRNA表达量无显著差异(P>0.05)。⑤Western blot结果显示:与对照组细胞的β-catenin和MMP-2蛋白表达量相比,NK-Lysin不同浓度组细胞的β-catenin和MMP-2蛋白表达量明显下调,差异显著,分别为:40μg/mL均为(P<0.001),20μg/mL(P<0.01)和(P<0.05),10μg/mL(P<0.05)和(P<0.01), PBS组的P-catenin和MMP-2蛋白表达量无显著差异(P>0.05)。结论:重组猪源NK-Lysin对肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移有一定的抑制作用;另一方面重组猪源NK-Lysin可能是通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移的。
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