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本文研究目的：采用骨组织工程技术，以骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)为种子细胞，转染bFGF基因后，观察bFGF对体外培养的骨髓基质干细胞增殖分化的影响；转染bFGF基因的骨髓间充质干细胞，以珊瑚人工骨为支架进行体外复合培养，观察支架的细胞相容性，为进一步的体内实验奠定基础。
研究材料与方法：
1.MSCs的获取及纯化培养：穿刺抽取新西兰大白兔胫骨骨髓，采用密度梯度离心法分离MSCs，再采用贴壁筛选法对分离出的MSCs进行纯化。
2.MSCs成骨诱导培养：对获得的部分MSCs用矿化诱导液诱导培养20天，进行Vonkossa染色。
3.bFGF-pcDNA3重组表达质粒的提取：DH-5α菌(含牛bFGF-pcDNA3真核表达载体)扩增，用UNIQ-10柱式质粒小量抽提试剂盒抽提质粒，并对所得质粒酶切鉴定。
4.bFGF-pcDNA3转染MSCs：利用脂质体转染bFGF-pcDNA3到MSCs，G418筛选获得抗性克隆。培养扩增后进行免疫组化和western-blot检测鉴定表达产物。
5.转染细胞增殖特性检测：利用MTT法检测转染细胞的增殖活力，并绘制生长曲线：利用流式细胞仪检测转染细胞的增值周期。
6.转染细胞同珊瑚人工骨的复合培养：将转染细胞制成细胞悬液，滴加至珊瑚表面复合培养，电镜观察珊瑚骨表面细胞的生长情况；利用MTT法检测复合培养情况下转染细胞的增殖活力。
研究结果：
1.获得大量形态均一的MSCs，部分细胞经成骨诱导培养后，Vonkossa染色可见黑色结节。
2.获得bFGF-pcDNA3重组表达质粒，经酶切鉴定，重组质粒含有bFGF目的基因片断。
3.脂质体介导bFGF-pcDNA3重组表达质粒转染MSCs，获得G418抗性克隆，经免疫组化和western-blot检测，证实转染细胞确实表达bFGF，并且表达部位在胞浆。
4.转染细胞增值活力加强，生长曲线上移，处于增殖周期的细胞比例加大。
5.扫描电镜观察转染细胞在珊瑚支架上生长良好，MTT检测表明转染细胞在珊瑚支架生长未受到抑制。
研究结论：
1.通过密度梯度离心和贴壁筛选相结合的方法可以成功分离获得MSCs。
2.用脂质体转染法能将bFGF-pcDNA3重组真核表达载体成功导入体外培养的MSCs，筛选得到稳定表达bFGF的MSCs，自身表达的bFGF可以促进MSCs增殖。
3.珊瑚人工骨具有良好的细胞相容性，具有广阔的应用前景。