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甘草享有“中药之王”的美誉,近年来,人们大量的采挖导致甘草资源的极度匮乏。采用植物细胞大规模培养利用甘草资源具有较大的优越性,可以不受季节、地点限制,因而日异受到人们重视。但细胞的继代培养具有一定的变异性,每次传代都有可能导致甘草有效成分产量下降,这使细胞大规模培养应用受到阻碍。解决这一困难的最好方法就是将甘草细胞系进行保存。论文成功的建立适合于甘草细胞保存的低温与超低温保存法,并对超低温保护剂的机理进行了初步研究。主要结果如下:1、2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑TTC法适合于甘草的脱氢酶活性测定,采用pH 7.6的缓冲液配置TTC反应液,丙酮作为提取剂,匀浆提取细胞内的三苯基甲酯TF,具有较好的精密性和稳定性。2、培养基的配方和保存温度对细胞的低温培养具有较大的影响。采用1/2 MS+30 g/L蔗糖作为保存培养基,4℃暗光保存甘草愈伤组织能长达6个月之久,但超过6个月细胞生长状态逐步下降,7个月时则不再生长,并且保存后细胞次生代谢产物的产量低于对照。3、超低温保存法是目前用于细胞长期稳定保存唯一有效的途径。慢速降温法不适合于甘草的细胞保存,但是玻璃化保存法取得了较好的成果。结果显示,选取14 d龄的甘草悬浮细胞在含有60 g/L蔗糖的MS液体培养基上预培养2 d,室温下25% PVS2预处理10 min,0℃条件下100% PVS2脱水15 min,投入液氮保存,48 h后再37℃水浴迅速化冻,用含有1.2 mol/L蔗糖的MS培养基洗涤3次,每次10 min,采用红氯四氮唑(TTC)法检测,存活率可达82.9%,恢复培养后的存活率可达80.4%。4、对玻璃化保护剂的机理做了初步研究,结果发现玻璃化试剂的处理使得6d、14d、22d细胞膜的膜透性、不饱和脂肪酸、可溶性蛋白以及热稳定蛋白都发生了变化,并且与保存后存活率具有一定的相关性。