高效氨氧化细菌的筛选、培养及其应用研究

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目前,我国近海环境污染严重,海水高度富营养化,赤潮现象频发。海洋富营养化的直接修复因海区面积大等原因,实施起来异常困难。城市污水排放入河,再汇集入海是海洋富营养化的源头之一。筛选并培养高效的氨氧化细菌对污水的生物脱氮具有积极地意义。本文通过DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术对宁波北仑港,及舟山附近海域氨氧化细菌的生态分布作了初步研究。实验所采取5个点的底泥样品中都有氨氧化菌的分布,各样品中氨氧化细菌的数量不多,不是样品细菌中的优势菌,每个季节各个采样点不同性质的样品中氨氧化菌的种类均不少于两种。分离出一株氨氧化活性较强,盐度适应范围较广的自养型菌株THD-1。细胞呈球状至椭球状,菌体大小约为0.5~0.8μm×0.7~1.3μm,革兰氏染色呈阴性。菌落呈无色透明状,针尖大小,边缘光滑。该菌能以硫酸铵为氮源,在好氧条件下进行氨氧化作用,产生大量亚硝酸氮。经测序,该菌株Nitrosomonas europaea的相似性为96.3%。通过研究pH值、温度、盐度和有无吸附物等影响菌株氨氧化活性的因素发现,在30℃时,盐度在0~25‰之间氨氧化活性最高;pH值大于或小于8氨氧化效率都明显受影响,最适pH值为8。加入CaCO3为吸附物后菌株的氨氧化活性有了明显的提高。建立了氨氧化细菌的分批补料式高浓度培养方法,用该方法对菌株THD-1进行培养,其OD600nm最高可达0.214,经MPN计数其最大活菌数可达7.5×108cells/mL。利用自制的生物小球对氨氧化细菌进行固定化,挂有氨氧化菌的小球可保存45天仍有较高氨氧化活性。用挂有氨氧化细菌的生化小球处理河道水,氨氮的去除率达50%以上。
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