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目的:非酒精性脂肪肝病（Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD）是指除外酒精和其他明确的肝损伤因素所致的以肝细胞内脂质过度蓄积为主要特征的临床病理综合征。其病理过程可从非酒精性脂肪肝进展到非酒精性脂肪肝炎甚至肝硬化、肝癌。脂肪储存小滴蛋白5（Perilipin5,Plin5）是PAT（Perilipin1、ADRP、Tip47）家族的新成员,主要表达于氧化代谢高的心脏、肝脏、骨骼肌及棕色脂肪组织中,其与细胞内脂质蓄积有着密切的联系。NAFLD患者肝脏及肥胖小鼠肝脏中Plin5表达显著增高,小鼠过表达Plin5可促进肝脏内甘油三酯蓄积,提示Plin5参与NAFLD的形成。然而,目前关于Plin5在参与脂质蓄积过程中的调控机制并不十分明确。碧萝芷（Pycnogenol,PYC）是法国沿海松树皮提取物,具有强大的抗炎、抗氧化作用。本课题组前期研究发现,在小鼠巨噬细胞中PYC可以抑制脂多糖（LPS）诱导的脂肪储存小滴蛋白2（Plin2）表达,在ApoE敲除鼠中PYC可以改善动脉粥样硬化、减轻肝脏脂质蓄积、促进白色脂肪棕色化。但是关于PYC对Plin5在NAFLD中的调控作用并没有研究报道。因此,本研究拟通过观察NAFLD模型中OA对Plin5的调控,并探讨PYC调控Plin5表达的潜在机制。研究方法:培养HepG2细胞,给予不同浓度的十八烯酸（油酸,Oleic acid,OA）处理不同的时间,通过RT-PCR及western blot检测Plin5及过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR?）的表达;分别给予PPAR?抑制剂GW6471、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR?）抑制剂GSK0660、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR?）抑制剂GW9662、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinases,p38MAPK）抑制剂SB203580处理后,通过RT-PCR及western blot检测Plin5的表达;给予磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase,PI3K）抑制剂LY294002处理后,通过RT-PCR及western blot检测Plin5及PPAR?的表达;油红O染色及定量进行评估细胞内甘油三酯的蓄积情况;给予不同剂量PYC处理后,GPO-POD酶法测定细胞内甘油三酯含量;通过RT-PCR及western blot检测Plin5及PPAR?的表达。结果:1.OA呈浓度及时间依赖性的诱导HepG2细胞中Plin5表达。给予不同浓度的OA（solvent control、200μM、400μM）及不同的时间（0h、12h、24h）处理后发现Plin5 mRNA和蛋白表达呈浓度及时间依赖性增加。2.PPAR?介导了HepG2细胞中OA诱导的Plin5表达。分别给予上述PPARs家族抑制剂处理后,只有GW6471能显著降低Plin5 mRNA表达（P<0.05）。进一步通过western blot发现GW6471处理后,Plin5蛋白表达也明显降低（P<0.05）。不同浓度OA处理HepG2细胞（solvent control、200μM、400μM）后,PPAR?mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性增加。3.PI3K介导了HepG2细胞中OA诱导的Plin5表达。给予p38MAPK抑制剂SB203580处理后,OA+SB203580组与OA组比较,Plin5蛋白表达无统计学差异（P>0.05）。而当给予LY294002处理后,OA+LY294002组与OA组比较,Plin5 mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05）。4.PI3K通过调控PPAR?介导了OA诱导的Plin5表达。给予HepG2细胞LY294002处理后,OA+LY294002组与OA组比较,PPAR?mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05）。5.OA通过调控PI3K/PPAR?表达促进HepG2细胞内脂质蓄积。随着OA浓度的增高,细胞内脂滴增多。分别给予GW6471及LY294002处理后,OA+GW6471组、OA+LY294002组细胞内脂质蓄积与OA组相比明显减少（P>0.05）。6.PYC抑制OA诱导的脂质蓄积,降低HepG2细胞内甘油三酯含量。给予不同剂量PYC处理后,OA+PYC10组、OA+PYC50组细胞内脂质蓄积减少,甘油三酯含量明显减少（P<0.05）。7.PYC抑制HepG2细胞中OA诱导的Plin5及PPAR?表达。给予不同剂量PYC处理后,OA+PYC10组、OA+PYC50组分别与OA组相比,Plin5及PPAR?mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论:1.OA可以通过PI3K/PPAR?通路促进Plin5表达,增加肝细胞内脂质蓄积。2.PYC可能通过PI3K/PPAR?通路下调Plin5表达,减少肝细胞内脂质蓄积和甘油三酯含量。