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禽类黏膜免疫作为机体抵御病原体感染的第一道免疫屏障具有重要意义。黏膜免疫的主要效应因子为SIgA，在黏膜表面阻止病原菌的粘附、增殖，启动免疫学生物活性，清除病原，保护机体抗感染等方面发挥重要作用。本研究重组表达了鸡SIgA重链片段蛋白，分离纯化后免疫BALB／c小鼠，并以鸡胆汁中分离纯化的SIgA作为检测抗原，筛选出1株能够稳定分泌抗鸡SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株C1，亚型鉴定显示该单克隆抗体为IgG2a、κ型；经间接ELISA和Western-blotting验证，所获得的1株单克隆抗体具有SIgA的高度亲和力和特异性，为开展家禽黏膜免疫机制的研究提供了重要技术手段。在此基础上，用生物素标记纯化C1单抗腹水IgG，建立了新城疫病毒(NDV)及H5亚型禽流感病毒(H5 AIV)特异黏膜SIgA的ELISA方法。利用这一方法，对H5禽流感病毒HA抗原重组NDV活疫苗(rL-H5)免疫SPF鸡局部黏膜特异性SIgA免疫反应进行了研究。结果，SPF雏鸡采用rL-H5经滴鼻点眼途径一次免疫，口腔-上呼吸道分泌液于免疫后2周，可检测到NDV特异SIgA免疫反应；免疫后3周能检测到低水平的H5 AIV特异SIgA免疫反应，H5 AIV的SIgA反应明显滞后于NDV，NDV和H5 AIV特异SIgA分别于免疫后3周和4周迅速降至接近免疫前背景水平；小肠分泌液分别于免疫后4周检测到明显的NDV及H5 AIV特异SIgA免疫反应，明显滞后于口腔-上呼吸道反应，但两种SIgA抗体水平均显著高于口腔-上呼吸道分泌液。SPF育成鸡采用rL-H5经滴鼻点眼途径间隔16周二次加强免疫，口腔-上呼吸道分泌液NDV及H5 AIV特异SIgA水平较一次免疫雏鸡反应明显提高，分别于免疫后一周即可检测到NDV及H5 AIV特异SIgA的显著增强免疫反应，2周后达到高峰，3周后迅速降至接近加强免疫前背景水平；小肠黏膜分泌液中NDV及H5 AIV特异SIgA反应时相与口腔-上呼吸道相似，抗体高峰出现不再表现滞后，但两种SIgA抗体水平同样显著高于口腔-上呼吸道分泌液。结果表明，重组NDV活载体疫苗rL-H5免疫后，可有效诱导上呼吸道及消化道黏膜NDV及重组表达H5 AIV抗原特异性SIgA免疫反应；同呼吸道相比，消化道具备更为强大的黏膜SIgA特异性免疫反应能力；初次免疫鸡呼吸道黏膜再次接触到感染性NDV或H5 AIV病毒抗原，可形成显著的特异性SIgA增强免疫反应；重组活载体疫苗诱导NDV及H5 AIV特异黏膜SIgA反应具有启动快速、持续时间短暂的特点。上述结果部分阐明重组新城疫活载体疫苗rL-H5的免疫保护机制，并对应用免疫程序的合理制定具有重要指导意义。