高良姜茎叶总黄酮的提取、分离纯化及生物活性研究

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高良姜(Alpinia officinarum Hance)是一种珍贵的药食同源的植物,富含多种功能性成分如天然精油、黄酮类化合物等,在食品、医药保健等各方面应用广泛。目前,国内外有许多针对高良姜根部的有效成分的研究和报道,充分利用其价值,但是茎叶直接被丢弃,其中的各种天然活性成分也未被有效地利用,造成资源的浪费。为了充分利用高良姜茎叶中的有效成分,提高高良姜资源的利用效益,本论文首先优化了高良姜茎叶黄酮类化合物的提取和纯化工艺,提高黄酮提取量和纯度,然后研究了高良姜茎叶黄酮的生物活性和稳定性。主要研究结果如下:(1)高良姜茎叶中黄酮类化合物的提取工艺采用传统的溶剂萃取法和超声波萃取法,以高良姜茎叶为原料,从中提取黄酮类化合物。研究结果表明:超声波法提取的高良姜茎叶黄酮的提取量高于传统溶剂法的提取量;超声波提取高良姜茎叶黄酮的最佳工艺条件为:超声的处理时间为10 min,超声波的输出功率为900 W,料液比为1:50(g:m L),提取温度40℃,乙醇体积分数50%,在此条件下,高良姜茎叶中黄酮类化合物的提取量最高,为108.63 mg/g。(2)高良姜茎叶黄酮的分离纯化通过比较8种大孔树脂AB-8、D-101、XDA-6、LSA-12、S-8、XAD-2、HPD-600和LX-213的静态吸附量、吸附率和解吸率,确定AB-8树脂最适合于高良姜的茎叶中的黄酮类化合物的提纯。通过静态试验,确定吸附液的最佳p H为6,最佳洗脱液为60%乙醇溶液。通过研究高良姜茎叶的黄酮类化合物的动态纯化过程,得到了最佳的动态纯化条件:上样液中黄酮的质量浓度:1 mg/m L,上样液的流速:1 BV/h,洗脱剂的流速:2 m L/min。在最佳的纯化工艺条件下,纯化后的高良姜茎叶黄酮的纯度达到77.37%,而纯化前的纯度只有37.63%。(3)高良姜茎叶黄酮的生物活性和稳定性通过对比高良姜茎叶纯化前的黄酮、纯化后的黄酮和VC对DPPH·、ABTS·的清除效果以及对铁离子的还原能力,研究高良姜茎叶部分中黄酮类化合物的抗氧化性质。从抗氧化试验结果中得到,纯化前的黄酮类物质的抗氧化能力与VC接近,纯化后的抗氧化能力要高于VC;当溶质的质量浓度为0.04 mg/m L时,纯化后黄酮对DPPH·的清除率达到90%,而纯化前黄酮和VC的清除率只有80%,说明从高良姜茎叶中得到的纯化前后的黄酮都具有较好的抗氧化的能力,且分离纯化能使高良姜茎叶黄酮的抗氧化活性显著提高。论文采用体外试验来研究高良姜茎叶黄酮的降血糖功能,通过测定黄酮对α-淀粉酶活性的抑制率来判断其降血糖功能的强弱,试验结果表明,纯化前和纯化后的黄酮以及阿卡波糖对α-淀粉酶的最高抑制率分别为51.93%、82.11%、89.25%,体现出纯化后的高良姜茎叶黄酮有较强的降血糖功能。除此之外,论文还研究了高良姜茎叶中黄酮类化合物的稳定性,测定了光照、温度和p H对它的影响,测定结果显示:在光照7 d后黄酮含量下降15.95%;黄酮在温度高于60℃的环境中会被破坏导致含量降低;提取液在p H 67的条件下,溶液中的黄酮类物质比较稳定,在强酸性溶液和强碱性溶液中的稳定性较差。
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