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酶联免疫吸附分析方法(ELISA)是一种成熟的、可用于定性或定量检测的免疫分析方法,具有较高的灵敏度和较强的特异性。本文利用ELISA建立两种物质的定量分析方法,这两种物质分别是植物激素茉莉酸类物质和抗癌药物五氟尿嘧啶。茉莉酸类(JAs)物质主要包括茉莉酸(JA)和茉莉酸甲酯(MeJA),是一类可调节植物生长发育和抗逆性的植物激素。JAs在植物体内含量很低,不当地使用外源性JA或MeJA还会降低生态效益。且JA和MeJA在生理功能上具有一定的差异,同时检测JA和MeJA仍然是植物生物学家面临的难题。因此,有必要建立一种灵敏度高、特异性强的方法,用于检测植物中JA和MeJA各自的含量。本文第一部分运用杂交瘤抗体制备技术,制备了针对茉莉酸的单克隆抗体(mAb),并以mAb为基础,结合两种样品提取法方法,建立了同时测定JA和MeJA的ELISA。所建立的ELISA的半抑制浓度(IC50)和检出限(LOD)值分别为2.02 ng mL-1和0.201 ng mL-1。交叉反应实验结果表明所建立的ELISA特异性良好。加标回收实验的回收率在79.6-89.5%,在可接受范围内,且与HPLC方法相关性良好,表明本方法在检测植物样品时具有良好的准确性。用该方法对三种植物样品中JA和MeJA的含量进行检测,JA的含量大约是MeJA含量的3～5倍。与同类方法相比,最大的优势在于建立了同时检测JA和MeJA的ELISA方法。五氟尿嘧啶(5-FU)是临床常用的广谱类抗代谢类化疗药之一,但其在癌症治疗中存在不足,开发一种实时、简便、高灵敏的5-FU血药浓度的检测手段具有很大的临床价值。本文第二部分制备了 5-FU多克隆抗体(pAb),并以此为基础建立 ELISA。所建立的 ELISA 的 IC50 和 LOD 分别为 72.2 ng mL-1 和 10.3 ng mL-1,其灵敏度并不能达到临床标准。交叉反应实验结果表明所建立的ELISA特异性较差,对于血样中不可避免的尿嘧啶、胞嘧啶以及胸腺嘧啶均有5.56-17.4%的交叉反应率。综合灵敏度和特异性,该抗体不适合检测5-FU血药浓度。为建立检测5-FU血药浓度的免疫分析方法,抗5-FU单克隆抗体正在制备中。目前,已经成功获得了一株亲和力强、抑制效果好的杂交瘤细胞株,后续将继续进行单克隆抗体的大量制备,并以此为基础建立5-FU的ic-ELISA分析方法,用于检测5-FU血药浓度。