葵花粕中绿原酸的提取纯化及其抗氧化特性研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:wxthaoa
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绿原酸(CGA)具有抗氧化、抑菌、抗突变和消炎作用,对绿原酸相关产品的开发己逐渐深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域,应用前景广阔。葵花籽仁含有1.1%~4.5%绿原酸,我国又有丰富的葵粕资源,以葵粕为原料提取绿原酸,不仅使向日葵资源得到综合开发利用,而且从葵花粕中去除了绿原酸改善了葵花蛋白粉色泽,而提高了葵花籽及葵花粕的利用价值。本研究主要从建立一种葵花粕中绿原酸准确、快速、简便的测定方法,葵花粕绿原酸提取工艺,大孔吸附树脂分离纯化葵花粕绿原酸,葵花粕绿原酸提取物成分及抗氧化特性研究等这四个方面进行研究。在比较分析高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度法(UV)测定CGA的基础上,通过运用Origin8.0数据处理分析软件,建立了一种快速、有效和准确的CGA检测方法。结果表明:这两种方法测定CGA的结果符合方程:Y=1.386+0.4082X+0.0132X2-8.438X3,R2=0.9856,其中X为UV测定结果,Y为HPLC测定结果,经验证,在5.5—33μg/mL浓度范围内,该方程准确可靠,从而可以采用UV法快速、准确地测量大批量样品中的CGA含量。绿原酸得率为考察指标,在单因素试验的基础上,运用DPS6.55数据统计分析软件,采用二次正交旋转组合试验设计方法,建立了乙醇溶液提取葵花粕绿原酸的二次回归模型,以绿原酸得率为响应值经响应面分析,确立醇提葵花粕绿原酸的优化工艺条件为:提取温度为75℃,提取时间为60min,固液比为1:20(W/V),乙醇浓度为60%(V/V),绿原酸的提取得率为2.57%(m/m)。采用大孔吸附树脂分离纯化绿原酸,通过分析十种树脂的吸附量和解析率,树脂NKA-II的吸附量和解析率最高,分别可达到60mg/g的吸附量和77.13%的解析率,因此选择树脂NKA-II为葵粕绿原酸纯化树脂;其静态吸附的最佳工艺参数为:吸附时间为2h,进液pH为3.6,绿原酸进样浓度为8.64mg/mL;通过大孔树脂动态吸附试验和解析试验确定了利用NKA-II树脂动态纯化葵花粕绿原酸的工艺参数为:洗脱剂为90%乙醇,吸附时间为8h,洗脱液收集时间在65-125min之间。将收集到的洗脱液低温浓缩后真空冷冻干燥,得到纯度为36.2%的绿原酸冻干粉。纯化前乙醇粗提物的纯度仅为16.6%,经过纯化后,纯度提高了近一倍。绿原酸的回收率达到79.6%。在绿原酸抗氧化功能研究中,通过考察不同纯度的葵花粕绿原酸乙醇粗提取物(粗提品)、标准品以及Vc对DPPH自由基清除率、还原活性、亚铁离子(Fe2+)鳌合能力、羟自由基(?OH)清除能力指标,对葵花粕绿原酸提取物进行了比较全面和系统的抗氧化特性研究。在清除DPPH自由基的试验中,各样品在不同的浓度时达到最大的DPPH自由基清除率96.7%,其中纯度为36.2%的NKA-II树脂纯化制品和Vc在不同浓度对DPPH自由基清除率趋势都相近,并且都在浓度为25μg/mL时, DPPH自由基的清除率达96.7%;在还原活性试验中,NKA-II树脂纯化制品和标准品的还原活性接近,在浓度为125μg/mL时,分别相当于177.86μg/mL和190.89μg/mL的L-cysteine,但是超滤制品和粗提品随着浓度的增大而还原活性并没有明显的提高。在亚铁离子螯合试验中,NKA-II树脂纯化制品和绿原酸标准品的螯合率明显高于参照组Vc和EDTA。在羟自由基的清除试验中,绿原酸标准品、Vc、NKA-II树脂纯化制品、超滤制品和粗提品的EC50值(EC50:清除50%的?OH时,样品的浓度值)分别为375、750、415、1500和1332μg/mL,通过EC50值可以明显看出,NKA-II树脂纯化制品的羟自由基的清除能力仅仅略低于标准品,高于粗提品、Vc和超滤制品的清除能力。
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