量子点免疫荧光法在儿童非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用

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目的儿童淋巴瘤是小儿血液系统疾病中仅次于白血病的第二大恶性肿瘤,早期诊断对其治疗及预后起着非常重要的作用。量子点是近年来发展起来的一种新型荧光纳米微粒,具有激发光谱宽而连续、发射光谱窄而对称、荧光强度高、光化学稳定性好、耐光漂白等优点。本实验应用量子点(quantum dots, QDs)免疫荧光技术在石蜡包埋的非霍奇金淋巴瘤组织切片上同时检测两种抗原的表达,并与免疫酶组织化学方法相比较,探讨基于量子点诊断的快速特异性及优越性,以期扩展到其他病种的辅助诊断。方法(1)在温和的水相条件下制备出水溶性的巯基乙酸量子点,并利用不同发射波长量子点(525nm、605nm)标记的链霉亲和素复合物(QDs-SA)为基础的免疫荧光技术,分别检测T淋巴母细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤病例组织表面TDT、CD3和CD19、CD20两种抗原的共同表达;(2)利用免疫酶标技术在连续切片上依次标记上述抗原,比较两种方法的抗原定位效果,并评估量子点免疫荧光法的光学强度及稳定性。结果经修饰后的QDs-SA复合物与巯基乙酸量子点的光学特性变化不大,且实验中并未影响到组织细胞形态学特征。荧光显微镜下观察到几乎所有T淋巴母细胞淋巴瘤(17/20)都有TdT、CD3抗原的共同表达,大多数弥漫大B细胞淋巴瘤(11/20)中也有CD19、CD20的共同表达,这与免疫酶组织化学技术检测结果定位完全一致,前者的阳性信号更强,有更高的光学稳定性,且无明显的荧光颗粒聚集现象,成像更清晰。结论表面修饰后的量子点有更好的组织相容性,并减少了其表面毒性。利用量子点免疫荧光法可以同时检测出组织石蜡切片中两种抗原的不同表达,这与免疫酶组织化学方法标记的抗原定位有高度一致性,相比较免疫酶标法一张切片仅标记一种抗原,可明显节约标本量,且有很高的阳性信号和强的光学稳定性。因此,量子点作为新型荧光探针,显示了其快速特异性及优越性,有望成为病理学诊断中的一种新的辅助检查手段。
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