铁离子对大肠杆菌外膜蛋白OmpW的调控机制研究

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先天免疫是机体对抗大部分细菌的主要免疫系统,而先天免疫防御最有效的策略就是控制体液中的铁。同时,铁也是细菌毒力和致病性的关键调控因子,细菌毒力及其致病性取决于其从宿主体内获取铁的能力。但目前对铁调控细菌毒力的分子机制并未完全阐明。近年发现广泛存在于革兰氏阴性细菌的外膜孔蛋白OmpW为一多功能蛋白,它不仅促进细菌耐受多种不利环境,也促进细菌抗先天性免疫作用,与细菌毒力及致病性相关,而且研究表明OmpW的表达量的变化与铁离子有关,但目前铁调控OmpW的详细机制尚未阐明。本研究首先通过Western blotting发现,在不同铁离子浓度下OmpW的表达发生改变,证实OmpW受铁离子调控。进而通过构建重组载体pACYC184-ompW,并转化ompW基因敲除菌(ΔompW)得到ompW基因补救菌(+ompW)。经菲洛嗪洛比色法分析正常菌、ΔompW和+ompW摄取铁离子差异,表明ΔompW菌摄入的铁离子较多,而K12和+ompW对铁离子的摄入较少,推测OmpW可能与铁离子摄取有关。此外,利用Real-Time qPCR检测正常和限铁条件下转录因子的表达,结果发现限铁下转录因子Fur表达量下调,而SoxS没有明显改变,表明Fur可能参与铁对OmpW的调控。为进一步确定转录因子的作用,运用载体pET-28a(+)构建了转录因子的高表达菌,然后利用Real-Time qPCR和Western blotting检测OmpW的表达情况,发现Fur高表达菌中OmpW的表达量上调,而SoxS高表达菌中OmpW的表达量下调。综上所述,这些结果表明铁离子通过Fur对OmpW发挥调控作用。该结果从新的角度揭示了铁离子促进细菌毒力和致病性的作用机制,为全面、深入揭示铁介导细菌毒力及致病机制提供新思路及奠定基础,也为防治铁介导的细菌感染疾病提供新靶点,本研究具有重要的理论意义和应用价值。
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