【摘 要】
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目的:探讨2型糖尿病人骨髓间充质干细胞(MSCs)的生物学特性并研究其增殖、凋亡、分化及旁分泌能力。用BrdU、DAPI、SPIO标记细胞进行体外示踪。为MSCs治疗2型糖尿病提供实验
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目的:探讨2型糖尿病人骨髓间充质干细胞(MSCs)的生物学特性并研究其增殖、凋亡、分化及旁分泌能力。用BrdU、DAPI、SPIO标记细胞进行体外示踪。为MSCs治疗2型糖尿病提供实验依据。方法:密度梯度离心结合贴壁培养法分离培养人MSCs,传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,流式细胞仪检测细胞表面抗原,添加诱导液诱导其向成骨细胞、成脂肪细胞分化并加以鉴定。比较正常人和2型糖尿病人MSCs的增殖、凋亡、分化及旁分泌能力。BrdU、DAPI、SPIO进行体外标记并计算标记率。结果:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化MSCs,细胞呈均一的成纤维细胞样,贴壁生长,以长梭形为主,细胞存活率均大于95%;流式细胞仪检测MSCs表面抗原CD44、CD45、CD71、CD105(SH2);诱导人骨髓MSCs向成骨细胞、成脂肪细胞分化,T2DM与正常人的MSCs比较差异不显著;MTT法检测结果显示在第1-6代两组OD值差异不显著(P>0.01);正常组分泌的HGF为(13316±1421) pg/106个细胞),VEGF为(1582±131 )pg/106个细胞;T2DM细胞组分泌的HGF为(l3321±1552) pg/106个细胞,VEGF为(1433±142) pg/106个细胞,两组HGF比较,无统计学差异(P>0.05) T2DM组MSCs分泌的VEGF低于正常组(P<0.05)。结论:1、本实验通过Percoll密度梯度离心法和贴壁筛选是获得较高纯度和活性的骨髓间充质干细胞的有效方法。2、2型糖尿病人MSCs的生长、增殖、分化及分泌能力与正常人相似,可以进行自体移植治疗。3、BrdU、DAPI、SPIO标记是安全、有效、便捷的体外示踪法。
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