目的和背景实验研究大肠癌鸡胚移植模型中,龙葵与VEGF抗体表达以及两者共同对大肠癌血管生成的影响。比较龙葵与VEGF抗体作用在鸡胚绒毛尿囊膜上，人大肠肿瘤新生血管的面积及密度的差异；同时应用免疫组化法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。免疫组化法检测CD34抗体（细胞表面的唾液粘蛋白）表达情况得出肿瘤微血管密度,应用LEICA图像采集处理分析软件反映鸡胚血管新生情况有无差异,分析龙葵与VEGF抗体对鸡胚移植模型中人大肠癌促血管生长这一机制的抑制作用。龙葵：一年生草本植物，全草含龙葵碱、澳洲茄碱、澳洲茄边碱等多种生物碱，民间较早就作为抗肿瘤药应生成的影响。肿瘤的血管生成这一观点由Folkman[1]于1971年首次提出，认为肿瘤生长与肿瘤血管生成密切相关。龙葵属茄科，临床发现对多种实体肿瘤及白血病等具有良好的防治疗效，近年来国内外开始涉足其抗肿瘤作用的有效成分和作用机制。龙葵碱可以通过改变膜蛋白的数量、功能、膜的通透性及ATP酶的活性等多个环节来改变细胞膜结构与功能，从而达到抗肿瘤的作用。研究发现龙葵糖蛋白对HT-29(人大肠癌细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、HCT-116(人直肠癌细胞)等多种肿瘤细胞具有细胞毒和促细胞凋亡作用。新近的研究表明龙葵提取物在促进肿瘤细胞凋亡时能增加细胞内NO的合成,这可能是促进细胞凋亡的机制之一[2]。应用激光共聚焦显微术(LCM)观察龙葵碱能明显降低S180和H22荷瘤小鼠细胞RNA／DNA值,使肿瘤细胞内DNA转录形成RNA的代谢受到抑制,细胞内基因产物——蛋白质的合成受阻[3]。研究比较抑制正常发育血管，龙葵组龙葵量在15mg时对血管新生的抑制作用不明显,而当龙葵量达25mg时，鸡胚的发育受到明显抑制或死亡，8只鸡胚样本中出现5只鸡胚死亡。当龙葵给药量为20mg时，给药48h后可见成形的胚胎活动，CAM上的给药载体旁边出现一个缺少血管的区域。龙葵总提取物对U266(多发性骨髓瘤细胞) G0-Gl期细胞数减少，S、G2-M期细胞数增加[4]。龙葵醇提物可明显延长荷瘤肝癌小鼠生存时间,抑制肉瘤的生长[5]。龙葵具有清热解毒、活血消肿、利水通淋的功效，临床上用龙葵水煎剂或注射剂治疗宫颈癌、食道癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、绒毛膜上皮癌、卵巢癌、肉瘤等多种恶性肿瘤，均取得了一定的疗效[6]。龙葵可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生[7]。实验表明低能量激光照射联合龙葵多糖可以抑制肿瘤细胞中VEGF的生成，导致血管生成的环节受到抑制,肿瘤组织血管生成减少，阻断肿瘤生长所需营养,抑制肿瘤细胞生长、侵袭、转移[8]。但是，龙葵是否具有抑制大肠癌新生血管的作用，至今还没有相应的研究，对内皮细胞的相关作用还未见报道。方法以9日龄的鸡胚为模型，移植人结肠癌HT-29细胞于鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上，孵箱培养1日后分别加入龙葵碱溶液（实验组1）、VEGF抗体（实验组2）及无菌PBS溶液（对照组），继续培养5日，观察移植瘤鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成情况，测量其微血管密度、微血管面积。莱卡立体显微镜拍照存档，用Imageproplus6.0软件分别分析实验组、对照组鸡胚绒毛尿囊膜微血管面积；将石蜡包埋的鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤病理切片，采用SP两步法作免疫组化，检查肿瘤组织的CD34抗原标记的微血管密度；SPASS17.0软件分析计算各组间微血管面积。结果通过对实验数据分析，实验组1、实验组2与对照组间微血管面积及微血管密度间存在明显差异，P<0.05，有统计学意义；实验组1与实验组2间存在明显差异，P<0.05，有统计学意义。结论龙葵碱及VEGF抗体对HT-29细胞鸡胚移植瘤新生血管生长有抑制作用，VEGF抗体抑制作用优于龙葵碱。