目的及意义:为了在细胞水平上将中华田园犬的遗传资源永久保存下来,并使保存下来的细胞能够在犬超数排卵技术的基础上为下一步核移植做准备,本试验选取了八个月健康的北方中华田园犬作为研究对象,采用组织块培养法构建了犬耳缘组织的成纤维细胞系。根据ATCC的具体要求,经原代培养、传代培养以及生物学特性的检测建立健康可利用的细胞系。结果:本试验培养的细胞在培养的各个阶段均呈现典型的成纤维细胞形态特征。原代培养因天数、密度不同出现个体差异,生长趋势呈现放射状或者漩涡状。对于所构建的细胞系,分别冻存了原代,二代,四代及六代。利用台盼蓝染色法检测细胞存活率,复苏后比冻存前有降低趋势,但均在95%以上。使用计数板计数F2、F4、F6代细胞一周的数目变化,绘制了复苏后细胞的生长曲线,均呈现“S”型,与细胞生长的一般规律相符。在含有15%胎牛血清的DMEM内连续6次传代,细胞形态特征及生长情况没有显著差异。培养过程中,进行了微生物污染检测;眼观、镜检以及利用无抗生素的培养液中培养的方式检测细菌、真菌、及病毒。使用Hoechst 33258染色法检测支原体。结果均为阴性,表明培养物没有被污染。染色体核型分析:体外培养的中华田园犬耳部成纤维细胞正常染色体数是2n=78,包括38组常染色体,1组性染色体。在测定的中期细胞中,均以二倍体为主,占镜检细胞总数90%以上,表明所建立的细胞系遗传性状基本稳定。结论:构建的中华田园犬耳部成纤维细胞系符合ATCC细胞系构建要求。