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前言人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2/neu)是表皮生长因子受体家族的第二号成员,是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜受体蛋白,在25%～30%的乳腺癌中过表达,在正常组织中低表达,是良好的肿瘤免疫生物治疗的靶分子。但HER2属自身蛋白,机体免疫系统对于过表达的自身蛋白往往处于耐受状态,此外肿瘤细胞在长期发展过程中在肿瘤局部形成了一个深度免疫抑制微环境,免疫细胞的作用在这个微环境中受到抑制。打破机体对肿瘤相关抗原的耐受、解除肿瘤局部的抑制状态、诱发有效的抗肿瘤免疫反应是肿瘤免疫治疗的关键。目的探讨异种抗原蛋白neu-Fc联合hGM-CSF和BCG的免疫调节作用;探讨异种抗原蛋白neu-Fc联合IFN-γ和BCG产生的抗肿瘤免疫效应。方法通过基因工程技术将大鼠neu L2-S2功能域与人IgG Fc区编码序列融合,构建真核表达载体;在CHO细胞中获得稳定表达,应用rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析纯化neu-Fc融合蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白;Ficoll法分离人PBMC,MTT法检测融合蛋白对PBMC的促增殖作用;通过ELISA法检测IL-12和IL-10水平的变化;FACS检测单核细胞膜表面相关分子的变化;LDH法检测PBMC在异种蛋白联合佐剂刺激下对靶细胞的杀伤作用;pcDNA3.0/HER2转染小鼠乳腺癌细胞EMT6,获得一株高表达HER2分子的EMT6/HER2细胞株;建立小鼠动物模型,观察佐剂和异种蛋白联合对肿瘤生长的影响;HE染色肿瘤组织切片。结果Neu-Fc是分子量约为66 kDa的蛋白;PBMC经MCF-7细胞上清诱导后,分泌IL-12的水平降低,分泌IL-10的水平显著升高;10 nM neu-Fc对PBMC具有显著的促增殖作用;Neu-Fc与佐剂联合作用可显著上调IL-12表达,下调IL-10表达;异种蛋白联合佐剂作用下,单核细胞表面MHC分子表达上调;异种蛋白联合佐剂刺激PBMC后,对肿瘤细胞的杀伤作用增强;EMT6/HER2细胞HER2表达率为99.59%;动物实验中,异种蛋白联合佐剂对肿瘤生长有明显的抑制作用;肿瘤组织切片HE染色中可以观察到,与对照组相比,异种蛋白联合佐剂组的肿瘤组织内和包膜周围有大量炎性细胞浸润。结论异种抗原蛋白neu-Fc联合hGM-CSF和BCG对Th1类和Th2类免疫反应有显著的调节作用;异种抗原蛋白neu-Fc联合IFN-γ和BCG可诱导有效的抗肿瘤免疫效应。