肿瘤细胞中唾液酸及氨基酸的检测和靶向成像

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唾液酸位于细胞外糖蛋白的末端,其表达量的显著上调是细胞恶性转化和肿瘤进展的普遍特征,监视其含量变化可以提供早期发现和诊断癌症的合理指标;基本氨基酸是天然蛋白质的基本结构单位,其含量的异常改变会导致人体代谢障碍,因此唾液酸及氨基酸的检测广泛应用于生物化学、临床医学等多种领域,建立其分析方法具有重要的意义。本论文的具体研究内容如下:1.唾液酸在细胞中的含量很低,并且细胞的基质非常复杂,因此需要建立一种灵敏度高、选择性好的唾液酸分析方法。首先探索了硼酸与唾液酸pH相关的作用机理,发现与一般顺式二羟基分子不同的是,硼亲和材料在pH=4.0的条件下对唾液酸吸附效率最高,在pH=1.5的时候几乎没有吸附;然后合成了硼亲和材料Fe3O4@PBA,依据其pH相关的吸附机理,在pH=4.0的条件下对唾液酸进行吸附,pH=1.5的条件下洗脱,对唾液酸进行固相萃取,并与高效液相色谱联用,建立了唾液酸的分析方法,运用于肿瘤细胞HepG2和Hela中唾液酸的富集和定量测定以及细胞成像,结果表明两种肿瘤细胞的唾液酸含量不同。该方法选择性好,吸附效率高、吸附和解析时间快、操作简便、使用纯水体系而避免引入有机溶剂,适合于分析复杂的生物样品。2.制备了一种唾液酸分子印迹聚合物,合成方法简单,传质速度快,磁性便于分离。根据硼酸和唾液酸与pH相关的作用机理,使用pH=1.5的酸性水溶液彻底洗脱模板分子,不仅可以解决模板泄露的问题,而且避免了复杂的洗脱过程和有机溶剂的使用,操作方便,节省时间,环境友好。最后将唾液酸分子印迹聚合物运用于转铁蛋白中唾液酸含量的测定。3.细胞中氨基酸含量的异常变化反映了细胞代谢的异常。使用异硫氰酸苯酯(PITC)对氨基酸柱前衍生,建立了11种基本氨基酸的分析方法,并应用于对细胞中游离氨基酸的定量检测。结果表明金纳米材料与细胞孵化一定时间后,细胞中游离氨基酸含量显著降低,并且材料浓度越大,游离氨基酸含量降低越明显,揭示了金纳米材料的毒性。
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