FMN和光黄素激光/荧光双通道检测ATP

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近年来,生物学上重要阴离子的分子识别与探测系统的研究越来越受到关注。由于核苷酸的生物学意义重大,研究它们的生物传感已经成为一个热门领域。在这些核苷和核苷酸中,研究比较多的是ATP,因为ATP不仅是一种普遍的能量来源还是许多生物过程的细胞外信号中介。除了ATP,还有ADP、AMP也在各种生物反应过程中扮演着重要角色,例如生物能量学、代谢和遗传信息转移方面都起着相当重要的作用。基于ATP等分子在生物过程中所起的突出作用,人们一直致力于发展检测它们的各种方法。现行的各类方法中仍然存在一些缺陷,例如复杂的色谱仪器系统、实验步骤繁琐和实验结果是否具有重现性。简单有效的实验方法是检测ATP迫切需要的,人们要从ATP探针设计、实验步骤以及可重复性多方面进行改善。我们的实验就是基于以上思想,从生物检测ATP的角度出发,利用FMN和光黄素的激光、荧光双通道法去检测ATP。FMN也就是维他命B2,在各类食品中广泛存在并且是身体必须的微量元素。我们在实验中使用的是维他命B2的钠盐形式即核黄素磷酸钠。我们通过两块凹面镜构建光学谐振腔使得FMN溶液能够出射激光,并测试得到FMN溶液的激光光谱和阈值。在此基础上检测FMN与ATP的响应曲线,证明FMN与ATP是有相互作用的而且ATP能够增强FMN溶液的激光的强度;同时也得到了FMN与ATP的荧光响应曲线,发现FMN是“turn-on”型ATP探针。FMN与ATP的响应不受其它阴离子,如Br-、Cl-、I-,PPi、SO42-,NO3-的影响,并且缓冲溶液的pH值对检测结果也是没有影响的。同时,FMN与ATP的代谢物ADP、AMP相互作用之后,三种物质增强光谱的程度不同。通过计算我们获得了FMN溶液检测ATP的检测限,激光与荧光分别为1.0、7.3μM。光黄素与FMN结构类似,只是碳链和磷酸根,它与ATP也具有激光/荧光双通道响应。我们还将FMN和光黄素检测ATP应用到实际中,即利用它们去检测尿样中是否含有ATP。随着加入到FMN和光黄素溶液中人体尿样体积的增加,相应的激光/荧光光谱的强度也在增加,结果证实人体尿样中也含有ATP我们检测ATP的方法简单快速,FMN和光黄素都是容易获得的材料,与前人合成材料相比,实验简化了许多,这为将来实现快速便捷检测ATP提供了新的思路。
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