骨骼肌卫星细胞是一类具有增殖能力和分化潜力的生肌干细胞,它存在于肌细胞膜和基膜两者之间,这类细胞对于以后骨骼肌的成长和再生起着重要的作用。该论文从内蒙古锡林郭勒盟采集乌珠穆沁羊的胎儿期(3月龄)及刚出生(0月龄)、中年羊(6月龄)肌肉样品,采用两步酶消化法和组织块法对骨骼肌卫星细胞进行体外提取培养;用1%的明胶和4%的多聚甲醛两种助贴壁剂来检测细胞的贴壁时间;利用差速贴壁法、peroll密度梯度离心法和改良后的纯化方法来进行细胞纯化;并用免疫组化鉴定了骨骼肌卫星细胞;用实时荧光定量技术检测了骨骼肌细胞在不同生长时期MRFs基因表达变化。得出如下结论:以组织块法分离和改良后的纯化方法纯化并用1%的明胶作为助贴壁剂得到的细胞数目较多且形态较好、细胞较纯,建立了一套高效稳定的骨骼肌卫星细胞分离纯化体系。用desmin和myosine抗体对该细胞进行鉴定,细胞质中的胞浆被染成棕色或者棕黄色,证实此细胞为骨骼肌卫星细胞。MRFs家族基因中MyoD和Myf5主要在骨骼肌卫星细胞的增殖期表达,MyoG和Myf6主要在细胞的分化阶段表达。其中MyoD和Myf5在细胞增殖期表达量上升,而到分化期时表达量下降;MyoG和Myf6正好相反,在细胞增殖期表达量下降,而到分化期时表达量上升。