论文部分内容阅读
目的细胞因子是一类对于造血细胞和非造血细胞起到驱化作用的8-10Kda蛋白。细胞因子家族成员不仅在淋巴细胞向炎性组织聚集发挥作用,同时在细胞因子受体协同作用下,介导淋巴细胞向骨髓(BM),淋巴结(LN)和其他组织归巢。细胞因子及其受体形成协调淋巴细胞迁移、维持淋巴细胞生存的环路。CXCR4/CXCL12、CXCR5/CXCL13、CCL3和CCL4在B慢性淋巴细胞增殖性疾病(BCLPD)维持骨髓微环境稳态、介导趋化迁移发挥重要作用,本文旨在通过骨髓病理免疫组织化学(IHC)方法研究BCLPD中CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4表达及其与慢性淋巴细胞白血病(CLL)各预后指标的相关性,探讨其在CLL预后中的意义。方法骨髓病理活检IHC方法检测87例BCLPD患者CXCR4.CXCR5、CCL3和CCL4表达水平。包括CLL52例、华氏巨球蛋白血症(WM)12例、滤泡淋巴瘤(FL)4例、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)4例、套细胞淋巴瘤(MCL)4例和不能明确分类的BCLPD (BCLPD-U)11例。应用SPSS20.0软件及Graph Pad Prism6.0软件进行统计学分析,不同分组间及具有不同预后指标的CLL患者组间CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4表达水平的差异采用卡方检验,Kaplan-Meier法分析至首次治疗时间(TTFT),Log-rank法进行差异性检验,P<0.05为有显著差异。结果CXCR4在CLL、WM阳性表达率分别为51.9%(27/52),75.0%(9/12)；在SMZL中均呈现弱阳性表达(100%,4/4)；MCL弱阳性表达率为75.0%(3/4),WM与SMZL、MCL组表达存在明显差异(P=0.003和P=0.014)。CXCR5在各BCLPD均有不同程度表达,差异无统计学意义。FL和CLL相较于其他BCLPD高表达CCL3,阳性率为75.0%(3/4)和38.4%(20/52)：WM弱阳性表达率为91.6%(11/12)；MCL阳性表达率50.0%(2/4)；CLL与WM、MCL组中CCL3表达有显著统计学差异(P=0.022和P=0.012)；FL与WM组的CCL3表达存在明显差异(P=0.009)。CCL4在CLL、WM和FL中阳性表达率分别为38.4%(20/52)、66.7%(8/12)和50.0%(2/4),各BCLPD均不同程度表达CCL4,差异无统计学意义。我们对CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4表达与CLL各项预后因素进行统计分析发现del(17p13)阳性组CXCR4表达明显高于阴性组(P=0.019)；CLL患者化疗不敏感组CXCR4表达明显高于化疗敏感组(P=0.014)：CCL3表达与血清胸苷激酶1(TK1)水平明显相关(P=0.008)。中位随访19个月(3～138个月),生存分析显示CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4表达不是确定TTFT的不良预后因素。结论BCLPD均不同程度表达CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4; CXCR4表达水平与临床疗效明显相关,具有一定的预后意义。目的趋化因子是一类约50个氨基酸组成的小分子蛋白,调节免疫细胞、淋巴细胞的成熟与迁移。细胞因子及其受体形成协调淋巴细胞迁移、维持淋巴细胞生存的环路。其中CXCR4/CXCL12、CXCR5/CXCL13、CCL3和CCL4在慢性淋巴细胞白血病(CLL)微环境中发挥重要,本文旨在研究CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4的基因在CLL中的表达及其与CLL各预后指标的相关性,探讨在CLL预后中的意义。方法采用实时定量逆转录PCR (qRT-PCR)分别检测91例CLL患者外周血单个核细胞(PBMC)及40例正常人外周血B细胞中CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4基因表达水平,运用循环阈值(Ct)比较法进行相对定量分析,上述基因相对表达量以公式2(-△Ct)表示。采用SPSS20.0软件及GraphPad Prism6.0软件进行统计学分析,不同分组间CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4基因表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验,Kaplan-Meier法计算至首次治疗时间(TTFT),Log-rank法进行差异性检验,P<0.05为有显著差异。结果91例CLL患者全部表达CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4基因；CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4基因在91例CLL患者表达中位值分别为0.4686(0.0220～2.5936)、1.7548(0.0045～19.5115)、0.1672(0.0063～13.0000)和0.2195(0.0010～13.1318)；正常人的“pool”经多次检测,得到的CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4基因表达中位值分别为0.3275(0.106949～0.8100)、2.5985(0.5700～3.7800)、0.0272(0.0015～0.8700)和0.6050(0.3500～2.1700),其中CCL3, CCL4在CLL患者与正常人表达差异有统计学意义(P=0.001和P=0.003)。统计分析示del(11q22.3)阴性组CXCR4mRNA表达明显高于阳性组(P=0.007)；CCL3mRNA表达水平与血清β2微球蛋白(p2-MG)表达水平呈明显正相关(P=0.039); CCL4mRNA表达水平与淋巴细胞绝对计数(ALC)、血清胸苷激酶1(TK1)呈明显负相关(P--0.035和P=0.019)。中位随访17个月(1～154个月),中位TTFT7.5个月(0～143个月),统计分析未发现CXCR4、CXCR5、CCL3和CCL4表达是确定TTFT的不良因素。结论CLL细胞CCL3、CCL4基因表达与正常B细胞有明显差异。CCL3基因表达水平与血清p2-MG表达相关,有一定预后意义。目的研究血浆中CXCL12,血清中CXCL13、CCL3和CCL4在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中表达及与CLL预后指标的相关性,探讨其在CLL预后意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测50例CLL患者血浆中CXCL12表达,血清中CXCL13、CCL3和CCL4表达。采用SPSS20.0软件及GraphPad Prism6.0软件进行统计学分析,不同分组间CXCL12、CXCL13、CCL3和CCL4表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验,Kaplan-Meier法计算至首次治疗时间(TTFT), Log-rank法进行差异性检验,P<0.05为有显著差异。结果50例CLL患者CXCL12、CXCL13、CCL3和CCL4表达水平中位值分别2103.21(12.10-3647.60) pg/ml,112.40(1.61-922.45) pg/ml,31.10(0.39～794.4) pg/ml和247.90(28.7～2327.3)pg/ml；15例正常人CXCL12、CXCL13、CCL3、CCL4表达水平中位值分别1768.30(1487.80～2457.80) pg/ml,16.73(1.39～105.50) pg/ml,19.90(3.80～68.40) pg/ml和28.20(7.10～53.10) pg/ml。统计分析提示CLL患者血浆中CXCL12,血清中CXCL13和CCL4水平高于正常人(P=-0.005,P=0.001和P<0.001)；统计发现①Binet A+B期患者血浆CXCL127k平明显高于Binet C期(P=0.043)；②血清CXCL13表达水平与年龄,β2-微球蛋白(β2-MG)水平明显相关(P=0.042和P<0.001)；③血清CCL3表达水平与年龄、β2-MG水平、免疫球蛋白重链可变区(IGVH)突变、胸苷激酶1(TK1)明显相关(P=0.049,P=0.008,P=0.041和P=0.025)；④中位随访27个月(1～138个月),中位TTFT6.5个月(0-78个月),生存分析提示高表达CCL4的CLL患者拥有较短TTFT(P=0.009),提示CLL血清中CCL4高表达是预后不良的指标。结论CLL患者血浆中CXCL12,血清中CXCL13和CCL4表达水平高于正常人,生存分析提示高表达CCL4的CLL患者拥有较短TTFT。