豇豆(Vigna unguiculata L.Walp.)是世界范围内一种重要的豆类作物,具有较强的抗旱性和耐热性,在农业生产中占有重要的地位。随着转基因技术的发展,各类作物相继开展了功能基因组学及转基因育种工作,但由于豇豆遗传转化存在芽再生率低、转化效率不高,外源基因整合能力差等问题,使得转基因技术无法高效应用。本研究就豇豆种子消毒方法、外植体基因型和筛选标记基因这三大影响豇豆遗传转化的因素开展研究,建立了较优的消毒方法,筛选出了芽再生效率高的基因型以及筛选标记基因。另外,还建立了一种利用发根农杆菌诱导豇豆发状根形成的遗传转化体系。主要研究结果如下:1.比较了氯气、次氯酸钠和升汞这三种不同消毒剂对豇豆种子进行消毒处理的效果,结果表明0.1%升汞消毒效果最好,对豇豆种子的伤害最低,在处理48小时后发芽率达到了 84.67%,且没有出现污染的现象。2.对51份不同豇豆基因型进行了根癌农杆菌侵染条件下高频再生基因型的筛选。在初筛中根据芽分化率的高低对供试豇豆基因型进行等级划分,并对分化率在80%以上的10个基因型进行复筛试验,重复3次。结果发现这10个基因型繁殖系数分布在1.17和1.93之间,其中“117E0815”和“白八月豇”繁殖系数较高,分别为1.70和1.93,尤以“白八月豇”的繁殖系数最高。这10个基因型的不定芽诱导率分布范围为22.51%-86.40%,以“白八月豇”的不定芽诱导率最高,达86.40%。因此,本研究筛选出来的地方品种“白八月豇”在根癌农杆菌侵染条件下兼具较高的繁殖系数和不定芽诱导率,可作为后续转基因研究的受体基因型。3.比较了筛选标记基因nptII和bar在豇豆愈伤组织诱导率和转化率方面的差异。发现利用草丁膦和bar筛选体系进行筛选后外植体的出愈率比利用卡那霉素和nptII筛选体系对外植体进行筛选后得到的出愈率高12.98%,二者存在显著差异。用卡那霉素和nptII筛选体系筛选得到的愈伤组织DNA进行PCR扩增后阳性率为100%,而用草丁膦和bar筛选体系对外植体进行筛选后得到的愈伤组织DNA的PCR扩增阳性率为98.61%,相互之间没有显著差异。通过GUS染色后观察发现利用卡那霉素和npt11筛选体系筛选得到的愈伤组织均为嵌合体,而用草丁膦和bar筛选体系得到的愈伤组织部分为嵌合体。进一步研究发现利用草丁膦和bar筛选体系进行筛选后得到的愈伤组织转化体比例占77.2%,而利用卡那霉素和nptII筛选体系进行筛选后得到的愈伤组织转化体比率不足50%,差异显著,表明尽管两种筛选体系均能在外植体上诱导转化体形成,但是用草丁膦和bar筛选体系进行筛选后得到的转化体比例显著较高。该筛选体系可为后续豇豆转基因研究提供技术支持。4.比较了离心管浸泡法和种子萌发袋法诱导豇豆发状根形成的效果。结果表明,在生根率上,种子萌发袋法诱导的平均生根数为10.12,比离心管浸泡法少1.86。而利用种子萌发袋法诱导形成发状根的转化率为33.12%,比离心管浸泡法诱导形成发状根的转化率高17.63%。进一步以种子萌发袋法对14个豇豆基因型的生根率和转化率进行了筛选。结果显示在所有供试材料中“II7E0826”兼具有较高的转化率和生根数,分别为55.67%和16,是发根农杆菌介导豇豆发状根形成的优异基因型,可作为后续豇豆组合苗基因功能验证的合适基因型。本研究为高效获得豇豆转基因植株奠定了基础,对后续开展豇豆基因功能验证及转基因育种具有重要意义。