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目的:通过生物信息学挖掘血管再狭窄的潜在靶点,并构建内皮细胞损伤模型和血管再狭窄大鼠模型,应用苏木提取物进行干预,探讨苏木提取物抑制血管炎症及血管再狭窄的作用机制。方法:第一部分:生物信息学挖掘血管再狭窄相关靶点:由美国NCBI的GEO公共数据平台获取血管再狭窄miRNA芯片GSE60959数据,利用在线分析工具矩阵,探针注释文件筛选差异miRNA。选取芯片中差异显著miRNA为研究目标。第二部分:苏木提取物对内皮细胞增殖的影响。将HUVECs分为空白组、miR-1183过表达组、miR-1183过表达加苏木含药血清组。采用基因转染内皮细胞进行模型复制,其中空白组内皮细胞完全培养基孵育48h;miR-1183过表达组细胞转染36h+内皮细胞完全培养基孵育12h;miR-1183过表达加苏木含药血清组转染36h+1μg/ml苏木含药血清12h;应用RT-PCR法检测miR-1183m RNA的表达,MTT法检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡水平;ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16水平;通过在线工具Targctscan分析靶基因,通过双荧光素酶实验进行验证,将预测到的基因进行功能分析;RT-PCR法检测PTEN m RNA的表达;Western-blot法检测PTEN、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、NF-κB p65蛋白的表达。第三部分:苏木提取物对血管再狭窄的影响及其分子机制研究。本实验选取SD大鼠40只随机分为空白组、模型组、苏木提取物组和阿托伐他汀组,除空白组外,其余三组通过钢丝接触法构建大鼠股动脉再狭窄模型。从模型复制的第28日起,各组给予相应的药物干预,其中空白组和模型组给予等体积的羧甲基纤维素钠溶液灌胃,苏木提取物组和阿托伐他汀组分别给予苏木提取物混悬液和阿托伐他汀混悬液灌胃治疗,均每日一次,连续灌胃28天。灌胃结束后观察各组大鼠的一般状态及体重变化;RT-PCR法检测股动脉组织中miR-1183m RNA的表达水平;HE染色观察大鼠股动脉病理形态,管腔直径及内膜厚度;免疫组化法检测股动脉组织中PTEN、Akt、p-Akt蛋白的表达水平;ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16水平;Western blot检测股动脉组织中PTEN、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、NF-κB p65蛋白的表达。结果:第一部分:通过生物信息学预测,芯片数据库中共筛选198个差异性表达miRNAs,其中89个miRNAs表达水平显著上调;109个miRNAs表达水平显著下调,本研究中取差异明显的miR-1183进行研究。第二部分:1.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显著抑制HUVECs中miR-1183m RNA的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。2.miR-1183过表达加苏木含药血清组能够显著增加HUVECs的细胞活力,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。3.miR-1183过表达加苏木含药血清组能够显著抑制HUVECs的总凋亡水平,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。4.通过在线工具Targctscan分析靶基因,发现miR-1183与PTEN存在结合位点,取预测到的基因进行功能分析,双荧光素酶报告基因实验证实PTEN基因是miR-1183作用的潜在靶基因。5.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显著抑制HUVECs中Bax蛋白的表达水平,上调Bcl-2蛋白的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。6.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显著降低HUVECs细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16的含量,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。7.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显著抑制HUVECs中NF-κB p65蛋白的表达水平,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。8.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显著抑制HUVECs中p-Akt蛋白的表达,升高PTEN蛋白的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01);而对Akt蛋白的表达水平无明显影响,与miR-1183过表达组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。9.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显著升高HUVECs中PTEN m RNA的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。第三部分:1.苏木提取物组能够改善血管再狭窄模型股动脉病理形态的改变。2.苏木提取物组能够下调动物模型中miR-1183m RNA的表达,与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。3.苏木提取物组能显著抑制大鼠股动脉Bax蛋白的表达水平,上调Bcl-2蛋白的表达,与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。4.苏木提取物组能显著降低大鼠股动脉血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16的含量,与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。5.苏木提取物组能显著抑制大鼠股动脉NF-κB p65蛋白的表达水平,与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。6.苏木提取物组能显著抑制大鼠股动脉p-Akt蛋白的表达,升高PTEN蛋白的表达,与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01);而对Akt蛋白的表达水平无明显影响,与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)结论:1.miR-1183在血管再狭窄患者中呈高水平表达。2.miR-1183可以促进血管内皮细胞凋亡,并促进炎症因子和细胞因子的分泌。3.苏木提取物能够下调内皮细胞中miR-1183的表达,进而通过PTEN/Akt信号通路抑制内皮细胞凋亡,达到抑制血管再狭窄的作用,这可能是其防治血管再狭窄的作用机制之一。