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背景和目的:非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)包含了一些列肝脏病理学变化,从单纯性肝细胞脂肪沉积到非酒精性脂肪性肝炎,甚至可以发展为肝硬化或者肝细胞癌。NAFLD特点是过多的中性脂质沉积在肝细胞中,导致脂质利用与脂质排出失衡。目前,NAFLD是世界上最常见的肝病,可影响到25%-30%人群,尤其是,在超重、肥胖及Ⅱ型糖尿病患者中,NAFLD非常普遍。而且,NAFLD与代谢综合征的特征密切相关,而表现在肝脏上的这些特征则可增加心脏代谢危险[1-3]。尽管NAFLD发病的病理生理学机制很复杂,并且尚未完全清楚[4],目前多数研究者认为长期高脂饮食(high fat diet,HFD)、肠道菌群紊乱紊乱参与代谢综合征的发病。此外,一系列研究已经表明肠道菌群与肠-肝轴之间存在着双向互动即微生物-肠-肝轴,应用益生菌干预则可以减轻肝脏脂肪浸润。然而,在非酒精性脂肪肝中,肠道微生物如何影响肠-肝轴发挥作用目前也尚未明确。非酒精性脂肪肝主要通过限制能量摄入、运动以及药物等方法治疗,但效果均不理想。我们前期研究证实,给予高脂饮食大鼠降脂益生菌(DM9054+86066菌株)干预通过调节肠道菌群,可降低大鼠血脂水平,改善肝脏脂肪变性,减轻肝脏炎症及肝细胞损伤,并且可以上调肠道FXR mRNA表达水平。这表明我们筛选的降脂益生菌可能通过调控胆汁酸代谢改善动物模型高脂血症及脂肪肝,但其对胆汁酸代谢的具体影响及机制仍不清楚。因此,本研究通过高脂饮食建立nafld大鼠模型,研究nafld大鼠胆汁酸代谢变化,并探讨降脂益生菌如何通过调节胆汁酸代谢改善大鼠非酒精性脂肪肝,为开拓nafld的新疗法提供理论依据。材料和方法:spf级雄性sd大鼠21只(体重180g-200g),适应性喂养7天后,随机选取7只分别分组为对照组,模型组,降脂益生菌干预组。对照组给予正常饮食,模型组及干预组给予高脂饮食。对照组及模型组给予生理盐水灌胃,干预组给予2×1010cfu益生菌(dm9054及86066各1×1010cfu)灌胃。建模及干预时间均为20周,每周测体重及饮食量一次。实验结束后处死大鼠,留取各组大鼠血清、肝脏、回肠组织及粪便。南京建成试剂盒检测大鼠血清甘油三酯及胆固醇水平;elisa检测大鼠血清ck-18m30水平。使用realtimepcr评估了cyp7a1、fxrmrna以及回肠fxr、asbt、fgf15mrna表达水平。westernblot检验肝脏cyp7a1、fxr及回肠asbt蛋白表达水平。免疫组织化学法分析肝脏fxr及肠道fxr蛋白表达水平。结果:1.大鼠一般指标变化:与对照组相比,模型组体重明显增加,血甘油三酯、胆固醇水平升高,血清ck18水平升高,差异均有统计学意义(p<0.05);与模型组相比,降脂益生菌干预后可使大鼠体重减轻,血清甘油三酯、胆固醇及ck18水平降低,差异均有统计学意义(p<0.05)。2.病理变化:与对照组相比,模型组肝脏he染色及苏丹染色可见明显炎症细胞及脂肪浸润,益生菌干预后肝脏脂肪浸润减轻;回肠he染色可见模型组小肠绒毛损伤,而益生菌干预后可使肠绒毛损伤好转。3.大鼠肝脏cyp7a1表达水平:与对照组相比,模型组肝脏cyp7a1mrna表达量明显降低(p<0.05);与模型组相比,干预组cyp7a1mrna表达量明显上升(p<0.05);肝脏cyp7a1蛋白表达结果与基因表达水平一致。4.大鼠肝脏fxr表达水平:与对照组相比,模型组肝脏fxrmrna表达水平明显升高(p<0.05);与模型组相比,干预组肝脏fxrmrna表达水平明显降低。westernblot及免疫组化结果与基因表达水平一致。5.大鼠肠道FXR-FGF15信号通路变化:与对照组相比,模型组肠道FXR,FGF15 mRNA水平降低(P<0.05);与模型组相比,干预组肠道FXR,FGF15 mRNA明显升高(P<0.05)。回肠FXR免疫组化结果与基因表达水平一致。6.大鼠肠道ASBT表达水平:与对照组相比,模型组小肠ASBT mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,干预组小肠ASBT mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。Western blot结果与基因表达水平一致。结论:1.长期高脂饮食可造成SD大鼠肝脏脂肪浸润及肝细胞损伤,降脂益生菌干预则可改善脂肪肝;2.在非酒精性脂肪肝大鼠模型中,长期高脂饮食下调CYP7A1表达主要通过加重肝细胞损伤,激活肝脏FXR通路并上调回肠ASBT来实现;降脂益生菌干预可通过减轻NAFLD大鼠肝细胞损伤,抑制肝脏FXR表达并下调回肠ASBT,最终上调CYP7A1表达;3.长期高脂饮食可使SD大鼠小肠绒毛损伤,抑制肠道FXR-FGF15信号通路;降脂益生菌则可改善小肠绒毛,激活肠道FXR-FGF15信号通路,从而改善脂肪肝;