登革病毒为黄病毒属的主要成员，是一类有包膜的单股正链RNA病毒。自然界存在的登革病毒有四个血清型，每型均可使人发病，症状从较轻微的DF，到较严重的DHF／DSS．自二十世纪中叶以来，登革病毒的传播已成为热带和亚热带地区严重的公共卫生问题，随着全球变暖和国际交往的日益频繁，DF／DHF发病率迅速上升，每年约有1亿人感染，威胁着世界上近三分之一人口的健康，对此WHO、有关国家防疫部门及病毒学家始终予以高度重视。但目前仍无安全有效的疫苗批准上市。 疫苗研究的起始阶段着重于传统的减毒活疫苗和灭活疫苗，但多年的临床试验数据表明，其四价疫苗不足以同时提供针对四个血清型的保护性免疫应答。近年，许多病毒学家致力于用能引起长期免疫保护反应的病毒亚单位抗原做疫苗。为避免ADE，人们将研究焦点从最初的E蛋白转向非结构蛋白，主要是NS1。近年多采用真核表达系统如杆状病毒和痘苗病毒等作为亚单位疫苗的载体，自上世纪80年代以来，痘病毒真核表达载体己大量用于构建JEV、HIV、流感、乙型肝炎和HSV等的疫苗候选株。 对NS1蛋白的抗原性和保护性研究的很多，已试验动物证明能保护动物免受致死剂量病毒的攻击，针对NS3蛋白近年研究也日益增多，因为该蛋白有很好的免疫原性，有多个T细胞识别位点，尽管就其细胞免疫所产生的免疫保护作用在国内外的研究都很少。基于以上资料，本研究将登革病毒的NS1和NS3分别重组到痘病毒载体上，通过痘病毒复制，稳定的表达有活性的目的蛋白，将重组活病毒进行动物试验，检测其抗体滴度，并做致死剂量病毒攻击，初步探索NS1／NS3的免疫保护性。 首先，分别构建了含登革2和登革4的NS1、NS3的重组质粒NS1／NS3—pGS20。利用Trizol试剂从感染DEN2和DEN4的乳鼠脑中提取病毒RNA，然后分别进行RT—PCR，得到DEN2和DEN4的NS1、NS3基因。先后分别插入克隆载体pMD18—T中测序检查序列的正确性，再通过目的片断和穿梭载体上